БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ...

биологические) критерии. К ним относятся определение относительного
содержания ГЦ-пар в ДНК, гибридизация нуклеиновых кислот, определение
нуклеотидных последовательностей в молекулах ДНК или РНК, применение
генетических зондов (ДНК-зондов), рестрикционный анализ ДНК, методы
генетического анализа (изучение переноса генов, генетических скрещиваний,
картирование хромосом бактерий и др.).
Относительное содержание ГЦ-пар в ДНК представляет собой
стабильный признак бактерий, не зависящий ни от возраста, ни от условий
культивирования, ни от отдельных перестроек генов в хромосоме
(т. е. данное свойство практически не изменяется под влиянием большинства
мутаций).
Молекулы ДНК разных микроорганизмов отличаются друг от друга
относительным содержанием пуриновых и пиримидиновых оснований,
которые формируют комплементарные пары в антипараллельных цепях ДНК.
Близкородственные микроорганизмы имеют идентичное или сходное
содержание ГЦ-пар в ДНК, а далеко отстоящие в генетическом отношении
сильно отличаются по относительному содержанию этих азотистых
оснований. Молярное содержание ГЦ-оснований у широкого круга прокариот
колеблется в широких пределах: от 25 до 80 мол. %. В то же время, например
у разных видов бактерий рода Pseudomonas, содержание ГЦ-пар в ДНК имеет
близкие величины – от 61,8 до 69,5 мол. % от общего количества оснований.
Следовательно, каждый вид бактерий имеет ДНК с характерным средним
содержанием ГЦ-пар, и эту величину можно рассматривать как один из
важных признаков вида.
Нуклеотидный состав ДНК бактерий можно определить химическими и
физическими методами.
К химическим относится метод хроматографии на бумаге. Определение
состава ДНК этим методом включает следующие основные этапы: выделение
ДНК, ее гидролиз до азотистых оснований, разделение их с помощью
хроматографии на бумаге, элюирование оснований с бумаги и последующая
ультрафиолетовая спектрофотометрия. Хотя этот метод довольно длителен и
трудоемок, он позволяет определить непосредственное соотношение
азотистых оснований в ДНК, в то время как в других методах расчеты
содержания ГЦ- или АТ-пар основаны на косвенных данных. Метод
хроматографии на бумаге является классическим методом определения
нуклеотидного состава ДНК, в сравнении с которым можно выявить точность
и корректность использования других.
К физическим относятся метод определения содержания азотистых
оснований по температуре плавления ДНК и метод ультрацентрифугирования
ДНК в градиенте плотности хлорида цезия.
4