БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ...

позволяет увеличить число копий исследуемого фрагмента ДНК в 10 6 –10 8 раз.
ПЦР может быть использована для идентификации ДНК любого
микроорганизма, если для него имеется соответствующий праймер.
Применение ПЦР особенно показано в тех случаях, когда трудно выделить
чистую культуру возбудителя какого-либо заболевания из-за сложности
методов культивирования, малого количества возбудителя в исследуемом
образце, высокой антигенной изменчивости и т. д. ПЦР незаменима для
обнаружения во внешней среде так называемых некультивируемых, но
жизнеспособных форм бактерий, в том числе патогенных (холерного
вибриона, сальмонелл, легионелл и др.). Тест-системы с праймерами для
проведения ПЦР в целях обнаружения возбудителей различных заболеваний
разработаны и внедряются в практику.
Определение нуклеотидных последовательностей (секвенирование)
дает возможность проводить сопоставительный анализ последовательностей в
различных молекулах ДНК и РНК. Поскольку секвенирование всего генома
бактерий в настоящее время – трудоемкая и дорогостоящая процедура, то
чаще всего анализируются нуклеотидные последовательности рибосомных
РНК – 16S-рРНК. Эта РНК универсально распространена, функционально
постоянна и, кроме того, достаточно консервативна, чтобы установить
глубокие эволюционные связи. Чем больше различий в последовательности
нуклеотидов 16S-рРНК у двух бактерий, тем раньше началось расхождение
между ними и, следовательно, тем дальше отстоят они друг от друга в
филогенетических отношениях.
Фенотипические критерии систематики
В классификации бактерий используют набор фенотипических признаков:
морфологических, культуральных, физиологических и биохимических.
Описание морфологических признаков включает определение формы,
размеров клеток и их взаимного расположения, типа жгутикования, наличия
капсулы, способности образовывать споры, особенностей внутреннего
строения. К категории морфологических признаков относится и окраска по
методу Грама, связанная со строением клеточной стенки. Однако только
морфологических признаков для идентификации бактерий недостаточно.
Если, например, выделены подвижные грамотрицательные палочки, не
образующие эндоспоры и имеющие длину 6 мкм, то определить их видовую
принадлежность только на основании этого невозможно, ибо указанными
признаками обладают бактерии многих видов.
При характеристике культуральных признаков, т. е. таких, которые
проявляются при выращивании бактерий в различных условиях, отмечают
9