БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ...

остаточной одноцепочечной нуклеиновой кислоты и измерение
радиоактивности двойных спиралей.
Простейший повсеместно используемый способ изучения реассоциации
нуклеиновых кислот – метод с применением колонки, содержащей
гидроксилапатит. Гидроксилапатит представляет собой гель фосфата кальция,
который при определенных условиях специфически адсорбирует только
двойные, но не одиночные цепи нуклеиновых кислот. Гибридизационную
смесь пропускают через колонку, которую затем промывают для удаления из
нее одноцепочечных молекул. Адсорбированные двойные спирали элюируют,
и в элюате определяют радиоактивность. Для этого метода необходимо
присутствие очень большого избытка немеченой ДНК (в несколько тысяч раз
превышающего количество меченой ДНК), чтобы предотвратить
реассоциацию меченых комплементарных цепей.
В экспериментах по реассоциации любого типа должны быть
стандартизированы температурные условия, ионная сила раствора и средняя
длина фрагментов ДНК, так как все эти факторы влияют на возможность
образования двойных спиралей.
Следует отметить, что метод молекулярной гибридизации ДНК не всегда
может быть использован для изучения родственных связей между
эволюционно далекими группами бактерий. Существует определенный
уровень дивергенции нуклеотидных последовательностей ДНК, ниже
которого образования гибридных молекул не происходит. В таком случае
изучают реассоциации ДНК–рРНК. Этот метод позволяет значительно
расширить список организмов, у которых можно выявить генетическую
гомологию благодаря тому, что на относительно небольшом участке
бактериального генома, кодирующего рибосомные РНК, исходная
последовательность оснований является более консервативной и сохраняется
значительно полнее, чем в основной массе хромосомной ДНК. В итоге путем
реассоциации ДНК–рРНК часто можно обнаружить довольно высокую
гомологию геномов двух бактерий, у которых реассоциация
ДНК–ДНК не выявляет заметной гомологии.
Как уже отмечалось, сравнивать генотипы бактерий можно с помощью
методов генетического анализа. Известно, что перенос генетической
информации и рекомбинация ее с ДНК реципиента может происходить только
между двумя родственными организмами. Осуществлению межвидового,
межродового переноса генов могут препятствовать внешние барьеры,
например различия в строении поверхностных структур клеток, что
ограничивает конъюгацию или необходимое для трансдукции прикрепление
бактериофага. Таким же препятствием является ферментативное расщепление
«чужой» ДНК после ее проникновения в клетку в результате рестрикции со
7