БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ...

Установлено, что существует прямая зависимость между содержанием
ГЦ-пар в молекуле ДНК и температурой ее плавления. Температура
плавления – это температура, при которой происходит денатурация ДНК в
результате разрыва водородных связей между азотистыми основаниями.
Поскольку число водородных связей между гуанином и цитозином больше
(3), чем между основаниями в АТ-парах (2), то чем выше содержание ГЦ-пар
в ДНК, тем выше температура ее плавления. Следовательно, температура
плавления любой ДНК служит показателем ее нуклеотидного состава.
Разделение цепей сопровождается заметным увеличением оптической
плотности при 260 нм, т. е. максимуме поглощения ДНК в УФ-све-те, что
легко измерить спектрофотометрически. При постепенном нагревании
образца ДНК поглощение увеличивается по мере разрыва водородных связей
и достигает плато при температуре, когда ДНК становится полностью
одноцепочечной (рис. 2).
Относительная оптическая
плотность
(D t° /D 25 °C ) при 260 нм
Температура, °С
Рис. 2. Зависимость поглощения ДНК от температуры
Средняя точка на кривой возрастания поглощения (указана на рисунке
стрелкой) – температура плавления (Т пл. ) – служит мерой содержания ГЦоснований,
а нуклеотидный состав ДНК определяется по формуле:
(Г + Ц) % = (Т пл. – 69,3°) . 2,439.
Метод ультрацентрифугирования в градиенте плотности хлорида
цезия (CsCl) основан на том, что имеется линейная зависимость между
плотностью ДНК и содержанием в ней ГЦ-пар. Препарат ДНК добавляют к
концентрированному раствору CsCl и центрифугируют в течение 24 ч.
Установившееся за это время распределение ДНК в градиенте CsCl зависит от
ее плотности. При определении нуклеотидного состава ДНК по градиенту
плотности в CsCl в качестве стандарта используют ДНК с заведомо известной
плотностью. Применение этого метода ограничено из-за сложности
оборудования.
5