Untersuchung immortalisierter Endothelzellen auf charakteristische ...

3.6.4 Bildauswertung
3 Methoden
Bestimmung der Zellzahl
Die erste Bilderserie (direkt nach der Aussaat) wurde mit dem Cell-Counting-Tool von Wimasis
(WimCount) ausgewertet. Dabei wurden kreisförmige Strukturen bestimmter Größen
erkannt und deren Anzahl im Bildausschnitt ermittelt. Aufgrund der Kenntnis der Größe
dieses Ausschnittes konnte die Zellzahl im gesamten well berechnet werden.
Bestimmmung der Netzstruktur
Um die verschiedenen Zelltypen auf die Fähigkeit Zellröhren zu bilden untersuchen zu können,
wurden 6 Stunden nach dem Aussäen Bilder der Zellen gemacht. Es wurden nur Bilder
untersucht, in denen die Zellkonzentration zu Beginn des Versuches 1 x 10 4 ± 1000 Zellen/well
betrug. Somit wurden Effekte, die durch unterschiedliche Zelldichte auftreten können, ausgeschlossen.
Mit Hilfe des Tube formation - Tools (WimTube) der Firma Wimasis wurde die Netzstruktur
ausgewertet. Ein solchermaßen bearbeitetes Bild ist in Abbildung 10 b) zu sehen. Erkannt
wurden dabei die von Zellen bedeckte Fläche (blau), die Gesamtlänge der Tubes (rot), die
Verzweigungspunkte (weiß) und die durch das Netz gebildeten Schlaufen (gelbe Zahlen).
Erfahrungswerte mit primären HUVEC zeigten einen gleichzeitigen Anstieg dieser Strukturmerkmale
über die Zeit (Wagner, 2012c). Daher konnte davon ausgegangen werden, dass dies
ebenso bei den immortalisierten Zellen der Fall sein würde. Stellvertretend für alle Strukturmerkmale
wurde die Gesamtlänge der Tubes (Total Tube Length = TTL) untersucht.
Dabei wurde sowohl die Auswirkung von verschiedenen Medien auf die Zellen als auch die
Angiogenese-Fähigkeiten der primären und immortalisierten HUVEC miteinander verglichen.
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