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la esferocitosis hereditaria y su diagnostico en la practica clinica

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EDTA 0,002 M a pH 7,4 como buifer de electroforesls 50, y se trabajó a<br />

temperatura ambi<strong>en</strong>te. Cada gel <strong>en</strong> p<strong>la</strong>ca preparado segón el método 9<br />

material descrito cont<strong>en</strong>ía 10 pocillos para aplicación de muestras, de<br />

forma que <strong>en</strong> cada <strong>en</strong>sayo se incluyó un control y nueve problemas , mant<strong>en</strong>i<strong>en</strong>do como reg<strong>la</strong> <strong>la</strong> proporción de 20 volúm<strong>en</strong>eS<br />

de solución de unción o destinclón por cada volum<strong>en</strong> de gel ~ La Unción<br />

se realizó por inmersión del gel durante 45 minutos <strong>en</strong> una solución con<br />

azul de Coomasie R 250 0,1%, SO 4Cu 0,i% (mejora <strong>la</strong> calidad de <strong>la</strong> tin—<br />

ción) con metanol 30% y ácido acético 10%; para <strong>su</strong> e<strong>la</strong>boración, previa-<br />

m<strong>en</strong>te se disolvieron los solutos <strong>en</strong> agua desti<strong>la</strong>da, añadi<strong>en</strong>do inmediatam<strong>en</strong>-<br />

te antes de teñir los geles los volúm<strong>en</strong>es correspondi<strong>en</strong>tes de metanoi y<br />

ácIdo acético. La destinclón se llevó a cabo <strong>en</strong> una solución de metanol<br />

25% y ácido acético 10%, que Iba si<strong>en</strong>do r<strong>en</strong>ovada aproximadam<strong>en</strong>te ca-<br />

da 15—20 minutos hasta conseguir una decoloración del fondo del gel,<br />

transcurri<strong>en</strong>do aproximadam<strong>en</strong>te 120-160 minutos <strong>en</strong> total. El azul de Coo-<br />

masía utilizado <strong>en</strong> el sistema pre<strong>su</strong>miblem<strong>en</strong>te se une a <strong>la</strong>s proteínas por<br />

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