la esferocitosis hereditaria y su diagnostico en la practica clinica

en el interior del marco destinada a sujetar el gel en placa mientras se
está montando entre las hojas de celofán . Este
aparato permite el secado simple y rápido de los geles en placa, habien-
do sido preconizado por Kyhse—Andersen por ser el método de secado
de mejores resultados en sus manos ~ El procedimiento es sumamente
sencillo: en primer lugar se equilibraron los geles de pollacrilamida duran-
te toda ¡a noche en glicerol al 3% (como alternativa se ha propuesto In-
cluirlo en el agua del ditimo lavado); este paso previene la rotura del
gel durante el secado. A continuación se ablandan dos hojas de celofán
en agua destilada, y una vez colocado el Gei—Drylng Frame R en una su-
perficie lisa, con las patas hacía arriba y la placa cuadrada en su inte-
rior, se dispone encima una hoja de celofán cubriendo las cuatro muescas
que presenta el marco. Seguidamente se coloca el gel sobre la hoja de
celofán, en el centro de la placa cuadrada y sobre él la segunda hoja de
celofán. En este momento es conveniente frotar suavemente, con los de-
dos protegidos por guantes hasta eliminar todas las burbujas de aire
entre el gel y el celofán. El siguiente paso supone tensar y sellar la pila
de celofán y gel mediante encajado de los listones de plástico en las
muescas del marco y su posterior fijado con las pinzas. Una vez separado
el Gel—Drying Frame R de la placa cuadrada> se coloca sobre sus patas,
de forma que puede ser secado por aíre a través de sus dos caras. El
tiempo de secado de los geles es de una noche a la temperatura ambiente
del laboratorio, pero puede reducirse a ¡ hora si el aparato se sitúa
frente a una fuente de calor. Los geles secos no se doblan y presentan
una superficie lisa que ofrece resultados óptimos en la densitometrla ~‘~‘
17, pudiendo conservarse sin deterioro indefinldamente.
3.6.4. lnmunoblot antiespectrina
Para evaluar la existencia de productos de degradación de la es—
pectrina en la membrana cnt rocitaria, los estromas de pacientes, proge-
nitores y controles fueron sometidos a análisis Inmunoquimico mediante
lnmunoblot, también conocido como Western—blotting 23~ Es un método
sensible para detectar fragmentos de degradación derivados de una proteína
mayor ‘, Para llevar a cabo este estudio en pacientes con EH Se
ha utilizado un método 2,29>30 derivado del descrito por TowbIn et al 172;
en nuestro caso se ha aplicado un método similar, modificado 156 del
descrito por Elkon 46
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