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la esferocitosis hereditaria y su diagnostico en la practica clinica

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medio de Interacciones, tanto lónicas como hidrofóbicas, pero no tiñe los<br />

complejos SDS-protefna efici<strong>en</strong>tem<strong>en</strong>te por competición con el SOS para~<br />

<strong>la</strong> unión a <strong>la</strong>s proteínas; por ello los pasos de <strong>la</strong> tinción y deseinclón<br />

requier<strong>en</strong> un ajustado equilibrio, <strong>en</strong> el que el alcohol ha de t<strong>en</strong>er al m<strong>en</strong>os<br />

cuatro funciones, <strong>la</strong> primera por producir una precipitación directa de <strong>la</strong>s<br />

proteínas desnaturalizadas por el SOS, <strong>la</strong> segunda por extracción del SOS<br />

5S <strong>la</strong> tercera por deshidratación<br />

de los complejos proceicos inmoblllzados<br />

y <strong>en</strong>cogido del gel, contribuy<strong>en</strong>do, por tanto, a <strong>su</strong> fijado al reducir el ta-<br />

maño efectivo de poro disponible para <strong>la</strong> difusión, y una cuarta función<br />

consist<strong>en</strong>te <strong>en</strong> mant<strong>en</strong>er el colorante <strong>en</strong> forma monomérica para facilitar<br />

<strong>su</strong> p<strong>en</strong>etración <strong>en</strong> el gel <strong>en</strong>cogido. En este esquema no está c<strong>la</strong>ro sí el<br />

ácido acético ti<strong>en</strong>e una función especial; se considera como razón de <strong>su</strong><br />

uso que promueve <strong>la</strong> fijación y estabilizo <strong>la</strong> unión del colorante (aniónico)<br />

a <strong>la</strong>s proteínas por mant<strong>en</strong>er <strong>en</strong> éstas una carga positiva s~.<br />

Los geles tratados segón este procedimi<strong>en</strong>to exhibían un patrón de<br />

bandas teñidas por azul de Coomasie simi<strong>la</strong>r al descrito clásicam<strong>en</strong>te 50,<br />

166 (figura 19). Se estimó el cont<strong>en</strong>ido proteico de <strong>la</strong>s mismas mediante<br />

d<strong>en</strong>sitomerria 29>30,51>106,166 a 540 y 570 nm <strong>en</strong> un aparato Hel<strong>en</strong>a<br />

Process — 24 (figura ¡7), con Integración del área bajo los picos de <strong>la</strong><br />

espectriria , de <strong>la</strong> anklrlna (banda 2.1), de <strong>la</strong> banda 4 y control> considerando como valor definitivo <strong>su</strong> media<br />

aritmética.<br />

Todos los <strong>en</strong>sayos de determinación del cont<strong>en</strong>ido de espectrina,<br />

ankirinu y banda 4 de los eseromas eritrocitarios se realizaron por dupli-<br />

cado, <strong>en</strong> dos días distintos.<br />

Los geles teñidos se conservaron mediante secado <strong>en</strong>tre dos hojas<br />

de celofán 177 utIlizando un Gel—Dryíng Frame R de JKA—Biotech Aps<br />

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