trabajo profesional - Universidad Nacional Autónoma de México

NORENA CASTILLO GOMEZ
FES CUAUTITLAN - UNAM
Valores de referencia: 0.2-1.0 mg/dL (2)
Fundamento de la determinación
Aunque las vías metabólicas de la bilirrubina están bien establecidas, las nuevas
técnicas de medición de la bilirrubina han modificado el uso de sus análisis. El
método más ampliamente usado en la determinación de la bilirrubina es la
diazoreacción que distingue las 2 fracciones de bilirrubina indirecta y directa. Sin
embargo, puede obtenerse una distinción más clara entre la bilirrubina no conjugada
y la conjugada, utilizando cromatografía de capa fina y de alta presión.
La designación de la bilirrubina como directa o indirecta deriva de observaciones,
donde la bilirrubina reacciona inmediatamente con el diazorreactivo de Ehrlich
(reacción directa), mientras que otra forma de bilirrubina lo hace sólo después de la
adición de alcohol (reacción indirecta) .La mayoría d los métodos actuales miden sólo
la bilirrubina total y la directa, presumiendo que la diferencia representa la bilirrubina
no conjugada.
La bilirrubina enlazada se une directamente con el reactivo en un medio acuoso.
Puede añadirse un acelerador para favorecer la unión de la bilirrubina libre con el
reactivo diazo. Esto permite la determinación de bilirrubina total. El alcohol o la
cafeína-benzoato de sodio (3) son comúnmente utilizados como aceleradores.
Winsten y Cehelyk utilizaron dimetilsulfóxido como acelerador.
Bilirrubina total + Acido Sulfanilico Diazotado
Azobilirrubina (roja)
El acido sulfanilico reacciona con el nitrito de sodio para formar el acido sulfanilico
diazotado. En presencia de dimetilsulfóxido, la bilirrubina indirecta (así como la
directa) reacciona con el acido sulfanilico diazotado formando azobilirrubina
La absorbancia de la mezcla de la reacción a 555nm es directamente proporcional
a la concentración de bilirrubina total en la muestra. (22)
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