Appunti di Principi-BiolMol CTF - Capitolo3 - Omero

Metodo di Sequenziamento di Maxame Gilbert« Marcatura terminale al 5’ o al 3’ del DNA a doppio filamento« Denaturazione e separazione dei due filamenti« Il DNA a singola elica viene suddiviso in quattro campioni, ognunodei quali viene trattato con un reagente chimico che demolisce una odue delle 4 basi del DNA.G = DMS + piperidinaG + A = DMS + piperidina + acido formicoC + T = idrazina + piperidinaC = idrazina + piperidina in NaCl 1,5 M« Le reazioni sono controllate in modo da avere una frammentazioneparziale: statisticamente tutte le possibili basi saranno degradateproducendo una serie di frammenti la cui lunghezza dipenderà dalladistanza tra l’estremità marcata e il sito di taglio« Separazione dei frammenti marcati mediante gel elettroforesi e« Visualizzazione dei risultati mediante autoradiografia