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Impieghi della PCR• Strategie di
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TemperaturePCR100Melting94 o C500T
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TemperaturePCR10050Melting94 o CAnn
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TemperaturePCR10050Melting94 o CAnn
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Dopo n cicli il miscuglio di reazio
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Fasi della PCR Denaturazione (melti
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• * Si possono usare al posto del
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Nested PCR
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Hot Start PCR
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Sintesi del cDNA
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• L’elettroforesi su gel dei pr
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IMPIEGHI DELLA PCRDiagnosi infezion
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Test geneticoAmplificazionemediante
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PCR-ARMS (Amplification RefractoryM
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PCR-ARMS (Amplification RefractoryM
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PCR-SSCP (Single Strand Conformatio
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PCR-SSCP (Single Strand Conformatio
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PCR-SSCP (Single Strand Conformatio
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PCR-HAD (HeteroDuplex Analysis)•
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PCR-HAD (HeteroDuplex Analysis)
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PCR-DGGE (Denaturation Gradient Gel
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PCR-DGGE (Denaturation Gradient Gel
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Resa della PCRResa effettiva: effet
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Soluzioni per PCR quantitativa Util
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Perché Real-Time?• Misura l'ampl
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Analisi tramite software
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SYBR greenUtilizzauna molecola fluo
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SYBR green Dopo l’annealing dei p
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SYBR green Metodica semplicePossono
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Sonde TaqMan La sonda di tipo TaqMa
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ForwardProbeReverse
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Reporter-QuencherDyeQuencher5,6 FAM
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Real-Time PCR:attività 5’>3’ e
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Real-time PCR: reagenti COMPONENTI
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Curve di amplificazioneFluorescenza
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QuantificazioneASSOLUTA i campioni
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