Appunti di Principi-BiolMol CTF - Capitolo3 - Omero

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Illumina:Sequencing-bysynthesis
Illumina sequencing technology• Sequencing: appaiamento dei primers aiframmenti DNA. Estensione dei primersusando i 4 dNPT con legati 4 fluorofori. Lafluorescenza è rilevabile me<strong>di</strong>antel’eccitazione con un raggio laser. Rimozionedel blocco reversibile al 3’ OH, così che puòvenir legato un nuovo nucleotide fluorescente.• I quattro nucleoti<strong>di</strong> fluorescenti competonoper il legame.
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Impieghi della PCR• Strategie di
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TemperaturePCR100Melting94 o C500T
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PCR-ARMS (Amplification RefractoryM
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PCR-HAD (HeteroDuplex Analysis)•
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Soluzioni per PCR quantitativa Util
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Perché Real-Time?• Misura l'ampl
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SYBR greenUtilizzauna molecola fluo
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SYBR green Metodica semplicePossono
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Sonde TaqMan La sonda di tipo TaqMa
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