Appunti di Principi-BiolMol CTF - Capitolo3 - Omero

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PCR-HAD (HeteroDuplex Analysis)
PCR-DGGE (Denaturation Gradient GelElectrophoresis)• La metodica è basata sul principio che una singola sostituzionenucleotidica può far variare la temperatura di denaturazione diun segmento di DNA.• Il DNA amplificato “wild-type” e mutante è separato su di ungel di poliacrilammide che contiene concentrazioni crescenti diun agente denaturante (formammide ed urea).• Quando i due filamenti del DNA iniziano a dissociarsi si hauna riduzione della velocità di migrazione rispetto allamolecola di dsDNA. Come detto sopra, la presenza dimutazioni modifica le proprietà di “melting” del DNA rispettoal DNA “wild-type”. Pertanto, i due tipi di molecole sidissociano in punti diversi del gradiente denaturante, e sarannodistinguibili in base alla diversa mobilità elettroforetica.
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• Si suddivide quindi la miscela
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ddCTPddCTPddCTPPRIMERDNA Polimerasi
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• Le diverse catene polinucleotid
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Metodo di sequenziamentodel DNA “
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Sequenziamento automatizzato con ma
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Le emissioni fluorescenti vengono c
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Metodo di Sequenziamento di Maxame
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Un altro metodo per la determinazio
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• Step 5Addition of dNTPs is perf
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Overview of ABI SOLiD SequencingChe
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Bead DepositionDeposit 3’ modifie
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SOLiD TechnologyLigation-basedchemi
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Exact Call ChemistryUp to 99.99% ac
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Latest Platforms:Illumina HiSeq:•
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Campi di applicazione delle piattaf
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