Appunti di Principi-BiolMol CTF - Capitolo3 - Omero
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Illumina sequencing technology• Library preparation: il DNA è frammentato, adenilato,oligonucleoti<strong>di</strong> adattatori sono legati a ciascuna estremità; iframmenti sono selezionati in base alle <strong>di</strong>mensioni e purificati.• Cluster amplification: i frammenti <strong>di</strong> DNA a singolo filamento sonoisotermicamente amplificate in celle <strong>di</strong> flusso per prepararle alsequenziamento. Le celle <strong>di</strong> flusso hanno degli oligonucleoti<strong>di</strong>legati, che si ibri<strong>di</strong>zzano agli adattatori dei frammenti <strong>di</strong> DNA.Amplificazione del DNA: produzione <strong>di</strong> copie <strong>di</strong> DNAcovalentemente legate alle celle. Ogni copia della libreria èamplificata attraverso una serie <strong>di</strong> estensioni e <strong>di</strong> amplificazioniisotermiche a ponte. I filamenti “reverse” vengono tagliati edeliminati me<strong>di</strong>ante lavaggio. Le estremità libere dei singolifilamenti <strong>di</strong> DNA nelle celle vengono bloccati.
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