Appunti di Principi-BiolMol CTF - Capitolo3 - Omero

Hot Start PCR• Un problema comune con la PCR è la formazione di prodotti nonspecifici,specialmente di dimeri dei primers. Questi prodottiindesiderati non solo interferiscono con la generazione degli ampliconidesiderati, ma oscurano anche le analisi che fanno seguito alla reazione.• I metodi di hot start PCR forniscono una soluzione a questa mancanza dispecificità riducendo od eliminando la formazione di prodotti nonspecifici prima del ciclo ad alta temperatura.• I metodi attuali di hot start PCR hanno come bersaglio la polimerasiattraverso il silenziamento della sua attività prima del passaggio inizialedi denaturazione, usando più comunimente od anticorpi bloccanti o lamodificazione chimica. Altrimenti sono state sviluppate metodichechiamate di sequestro dei primers in cui una proteina ricombinante silega ai primers a basse temperature rendendoli non disponibili perl’estensione da parte della polimerasi. Ad alte temperature la proteina èdanturata e quindi si dissocia dai primers.