Appunti di Principi-BiolMol CTF - Capitolo3 - Omero

• Si suddivide quindi la miscela in 4 frazioni (A, T, G, C), aciascuna delle quali si aggiunge un diverso ddNTP, cioèddATP, ddTTP, ddGTP, ddCTP e si incuba per un tempoopportuno.• Poichè l’incorporazione del ddNTP nella catena inaccrescimento è del tutto casuale, durante l’incubazionesi formano in ciascuna frazione frammenti polinucleotidicidi lunghezza diversa, aventi tutti come sequenza inizialequella del primer, sequenza successiva in direzione 5’ 3’complementare al segmento duplicato del DNA stampo, etutti terminanti con il ddNTP presente in quella frazione.• Dopo incubazione le quattro frazioni vengono denaturateal calore, per separare le catene nucleotidiche appaiate, esottoposte ad elettroforesi in un unico gel dipoliacrilammide.