Appunti di Principi-BiolMol CTF - Capitolo3 - Omero

PCR-DGGE (Denaturation Gradient GelElectrophoresis)• La metodica è basata sul principio che una singola sostituzionenucleotidica può far variare la temperatura di denaturazione diun segmento di DNA.• Il DNA amplificato “wild-type” e mutante è separato su di ungel di poliacrilammide che contiene concentrazioni crescenti diun agente denaturante (formammide ed urea).• Quando i due filamenti del DNA iniziano a dissociarsi si hauna riduzione della velocità di migrazione rispetto allamolecola di dsDNA. Come detto sopra, la presenza dimutazioni modifica le proprietà di “melting” del DNA rispettoal DNA “wild-type”. Pertanto, i due tipi di molecole sidissociano in punti diversi del gradiente denaturante, e sarannodistinguibili in base alla diversa mobilità elettroforetica.