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Tivemos trabalhos com vacinas de DNA e de subunidade protéicas usando o gene hsp65 de Mycobacterium leprae. Nenhuma dessas vacinas induziu níveis de proteção. Estamos estudando, por meio de vacinologia reversa, o genoma de Corynebacterium para identificarmos novos alvos, Recentemente, fizemos uma revisão dos que já foram descritos. D‘AFONSECA, V.; MORAIS, P.M.; DORELLA, F.A.; PACHECO, L.G.C.; MEYER, R.; PORTELA, R.W.; MIYOSHI, A.; AZEVEDO, V. A description of genes Corynebacterium pseudotuberculosis useful in diagnostics and vaccine applications. Genetics and Molecular Research, v. 7, p. 252, 2008. O nosso laboratório tem testado várias tecnologias de desenvolvimento de vacinas e fomos um dos grupos pioneiros no Brasil com vacinas de DNA. Inicialmente, vários aspectos técnico-científicos relacionados a essa tecnologia foram padronizados, dados esses ainda não disponíveis na literatura científica. Em se tratando de um trabalho conceitual relevante, no qual demonstramos que a imunização genética via administração intramuscular induz uma resposta imune do tipo Th1 (IFN-γ), enquanto a imunização gênica epidermal com o gene gun induz uma resposta imune do tipo Th0 (IL-4, IFN-γ), um perfil misto entre Th1 e Th2, determinamos o perfil da resposta imune induzida por diferentes rotas de imunização gênica em camundongos. Quando se questiona qual é o tipo de resposta imune necessária para induzir proteção contra um determinado patógeno, faz-se de suma importância a informação gerada acima descrita. O perfil Th1 gerado pela injeção intramuscular de DNA está relacionado à quantidade de plasmídio utilizado, a qual é cem vezes maior do que a utilizada na biobalística, e é, conseqüentemente, o maior número de motivos CpG presente no DNA plasmidiano que estimula policlonalmente a produção de IL-12, IL-18, dentre outras citocinas que induzem um perfil de resposta imune do tipo Th1. AZEVEDO, V.; OLIVEIRA, S.C. (1998) Vacinas de DNA: O Paradigma das Vacinas Gênicas. Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento, n. 5, p. 40-43. 104
AZEVEDO, V.; LEVITUS, G.; MIYOSHI, A.; CÂNDIDO, A.L.; GOES, A.M.; OLIVEIRA, S.C. Main features of DNA-based immunization vectors. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, Ribeirão Preto, v. 32, p. 147-153, 1999. OLIVEIRA, S.C.; ROSINHA, G.M.S.; DE-BRITO, C.F.A.; FONSECA, C.T.; AFONSO, R.R.; COSTA, M.C.M.S.; GOES, A.M.; RECH, E.L.; AZEVEDO, V. Immunological properties of gene vaccines delivered by different routes. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, Ribeirão Preto-SP, v. 32, n. 2, p. 207-214, 1999. IV. 4.2.2 Brucella Recentemente, fui procurado pelo Dr. Owais da Índia que me solicitou suporte acerca dessa metodologia para pesquisas com vacinas de DNA contra a Brucelose. Realizamos um trabalho árduo de clonagens e enviamos a ele os genes clonados, e expressando as proteínas solicitadas nos vetores de vacina de DNA. SINGHA, H; MALLICK, A; JANA, C; ISORE, D; GOSWAMI, T; SRIVASTAVA, S; AZEVEDO, V; CHAUDHURI, P; OWAIS, M. Escheriosomes entrapped DNA vaccine co-expressing Cu Zn superoxide dismutase and IL-18 confers protection against Brucella abortus. Microbes and Infection, p. 1, 2008. Como médico veterinário e associado ao Prof. Sérgio Oliveira, especialista em Brucelose, começamos também a testar as vacinas de DNA com antígenos de Brucella abortus. A brucelose é uma zoonose causada por bactérias do gênero Brucella, constituindo uma enfermidade adquirida, principalmente por meio do contato com animais infectados ou, freqüentemente, por consumo de leite e seus derivados e de produtos animais contaminados. Estima-se que, anualmente, a brucelose animal causa um prejuízo aproximado de US$ 30 milhões de dólares para a economia brasileira. No homem, a brucelose pode causar febre ondulante, endocardite, artrite, osteomielite e complicações neurológicas, enquanto, nos animais domésticos, os órgãos reprodutivos são principalmente afetados, causando aborto e infertilidade temporária. Outra questão que se levanta em contextos de 105
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