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produção de vacinas, sendo aqui, vacinas de DNA, é a biossegurança, motivo de intensos debates entre a comunidade científica e órgãos reguladores. Não só pelo fato de ser Membro Titular da Comissão Nacional de Biossegurança (CTNBio-MCT), mas preocupados com essa questão, nosso grupo redigiu uma extensa revisão crítica acerca dos problemas potenciais de biossegurança das vacinas de DNA, avaliando a possibilidade da geração de diferenciação celular através da ativação de genes indutores de tumor ou da inibição de genes supressores de tumor. De acordo com relatos na literatura, a probabilidade de mutação induzida em um dado gene pela integração do plasmídio vacinal no genoma da célula do hospedeiro é 1.000 vezes menor do que a freqüência de mutação espontânea que ocorre no genoma das células dos mamíferos. Com o objetivo de se desenvolver uma vacina de DNA contra a brucelose, a possibilidade de o gene GroEL da B. abortus ser usado como vacina de DNA foi avaliada. Os resultados obtidos confirmaram que a via intramuscular induz uma resposta do tipo Th1, e o gene gun uma resposta do tipo Th0, com base na detecção das citocinas IFN-γ e IL-4 no sobrenadante de cultura de esplenócitos, e pela produção de IgG1 e IgG2a nos animais imunizados. Não obstante, a proteção contra infecção em nenhuma das duas rotas de imunização foi obtida. Tais resultados sugerem que, apesar de o gene GroEL, o qual codifica uma proteína de choque-térmico, ter sido utilizado com sucesso como vacina de DNA em outros modelos de infecção bacteriana, tal como o da tuberculose, o mesmo não foi capaz de induzir imunidade protetora contra a brucelose experimental, o que pode ser explicado pela sua própria característica ou, até mesmo, pela necessidade de se adicionar um adjuvante na vacina de DNA para incrementar a sua eficiência. Um outro gene testado foi aquele que codifica a enzima gliceraldeído-3fosfato-desidrogenase (GAPDH) da B. abortus, pela primeira vez identificado e descrito pelo nosso grupo. Quando utilizada como antígeno, a proteína GAPDH nativa ativava fortemente linfócitos T de animais imunes. Além disso, camundongos vacinados com a GAPDH recombinante ou com a cepa vacinal de B. abortus apresentavam um perfil de resposta imune do tipo Th1. Considerando-se que, em Streptococcus, Schistosoma, Trypanosoma e Candida spp, a GAPDH é um importante antígeno ligado à patogênese, decidimos testar o gene GAPDH sozinho ou associado com o gene da IL-12 murina como vacina de DNA contra a brucelose experimental. Apenas no segundo caso, quando o gene que codifica a enzima 106
GAPDH foi associado ao gene que codifica a IL-12 murina, observamos proteção parcial contra a infecção. AZEVEDO, V.; OLIVEIRA, S.C. Vacinas de DNA e Biosegurança. Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento, Uberlândia-MG, v. 18, p. 46-48, 2001. ROSINHA, G.M.S.; MIYOSHI, A.; AZEVEDO, V; SPLITTER, G.A.; OLIVEIRA, S. C. Molecular and immunological characterisation of recombinant Brucella abortus glyceraldehyde-3-phosphate-dehydrogenase, a T-and B-cell reactive protein that induces partial protection when co-administered with an interleukin-12-expressing plasmid in a DNA vaccine formulation. Journal of Medical Microbiology, UK, v. 51, n. 8, p. 661-671, 2002. LECLERQ, S.; HARMS, J. S.; ROSINHA, G. M.; AZEVEDO, V.; OLIVEIRA, S. C. Induction of a Th1-type of immune response but not protective immunity by intramuscular DNA immunisation with Brucella abortus GroEL heat-shock gene.. Journal of Medical Microbiology, Inglaterra, v. 51, n. 1, p. 20-26, 2002. Outros trabalhos envolvendo vacinas vivas atenuadas por deleção gênica foram realizados, uma vez que constituem possíveis formas de vacinas a serem estudadas. Tal estratégia vem sendo amplamente utilizada para o controle de infecções causadas por bactérias patogênicas, por meio de linhagens vivas atenuadas, pela deleção ou inativação de genes, supostamente, envolvidos em virulência. A vantagem da vacina viva atenuada, quando comparada a outras formas de vacinas, é o fato de a mesma induzir um forte estímulo para a produção das citocinas, as quais são importantes para o controle da infecção bacteriana intracelular, como, por exemplo, a IL-12 e o IFN-γ. O uso da recombinação homóloga dupla como recurso genético para obtenção desses mutantes é uma das técnicas utilizadas para tal fim. Como parte do trabalho de dissertação de mestrado da minha aluna Daniela Freitas, o gene exsA da Brucella abortus, homólogo a um transportador de ATP presente na bactéria Rhizobium meliloti, envolvido no transporte e arquitetura do exopolissacarídeo desse patógeno, foi isolado e caracterizado. Em seguida, construímos um vetor suicida contendo o gene de resistência à canamicina dentro do gene exsA e produzimos uma cepa mutante do 107
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