Universidade Federal de Minas Gerais Instituto de Ciências ...

comunicação entre os dois compartimentos celulares gerados na esporulação.
Elucidar todos os passos da diferenciação celular em um organismo inferior pode
fornecer informações preciosas para o estudo desse fenômeno nos organismos
superiores, nos quais erros detectados no processo podem desenvolver neoplasias.
Imediatamente após minha chegada aos Estados Unidos, Dr. Cutting, tendo
sido convidado a escrever um capítulo sobre metodologias de mapeamento genético
em Bacillus subtilis, convidou-me para ser co-autor, deu-me a incumbência de
escrevê-lo e ele faria a correção final. Em trinta dias, o manuscrito estava nas suas
mãos para ser apreciado e foi, então, publicado pela editora americana Academic
Press.
Apesar de possuir financiamento significativo para desenvolver projetos, o Dr.
Cutting desejava que eu também obtivesse outros fundos. É importante para um
laboratório nos Estados Unidos que o pós-doutorando consiga atrair recursos
financeiros. Ele me forneceu subsídios para escrever o projeto, ou seja, a bibliografia
existente, apresentou-me os instrumentos genéticos que possuía no laboratório e o
seu projeto financiado, no qual estava inserida a idéia sobre a qual eu trabalharia e
escreveria. Submetemos meu projeto, o qual tinha como objetivo tentar isolar e
identificar genes regulados pelo fator sigma G à agência PEW (Latin American
Fellows Program). Infelizmente, não recebi apoio financeiro, mas comecei a
trabalhar, imediatamente, no desenvolvimento desse projeto.
A estratégia que usei para a identificação destes genes foi construir uma
linhagem de B. subtilis mutante para os genes spoIIIG e spoIVB. O primeiro gene
codifica o fator sigma G e o segundo, uma proteína transmembrânica do endósporo,
que ativa o gene que codifica o fator sigma K presente na célula original ou Mother
cell. Transformei a linhagem mutante com um plasmídeo que continha o gene que
codifica para o fator sigma G regulado por um promotor induzido por IPTG e, em
seguida, transfectei com uma biblioteca de fusão construída em um bacteriófago que
infecta B. subtilis. O gene de B. subtilis que estivesse fusionado com o gene da
betagalactosidase poderia ser selecionado pela sua coloração azul. Trabalhamos
com 28.000 clones e selecionamos 22; destes, três eram genes que nunca tinham
sido identificados. Esse trabalho foi feito em menos de nove meses de execução.
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