Anais VII SIC - UERN

Anais do VII SIC 937
após alguns meses de armazenamento, incidência de doenças e desuniformidade do material são
frequentes (SEVERINO et al., 2006).
A multiplicação in vitro de espécies de interesse econômico vem sendo muito utilizada
porque permite um acesso rápido e seguro dos agricultores às mudas de melhor qualidade,
especialmente das variedades tradicionais e as desenvolvidas pelos programas de melhoramento
genético, mantendo a fidelidade genética das espécies (FARIAS et al., 2006). Nesse sentido,
objetivou-se com o presente trabalho, buscar um método eficaz no controle microbiano do cultivo
in vitro de J. curcas.
MATERIAL E MÉTODOS
Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecido Vegetal
(LCTV) da Faculdade de Ciências Exatas e Naturais, da Universidade do Estado do Rio Grande do
Norte (UERN), localizada no município de Mossoró-RN. Os explantes utilizados foram
provenientes de plântulas cultivadas em casa de vegetação, a partir de sementes.
Foram realizados três experimentos em 2011, em delineamento inteiramente
casualizado. O primeiro no mês de junho, e em seguida nos meses de julho e agosto de 2011. As
coletas do material vegetativo foram realizadas pela manhã com o auxilio de uma tesoura de poda.
O material Coletado foi levado ao laboratório, onde foram descartadas as folhas, permanecendo
apenas os brotos mais jovens, os quais foram submetidos a uma prévia desinfestação em água com
duas gotas do detergente Tween 80, seguido por10 minutos de lavagem em água corrente.
1. Assepsia de explantes de J. curcas
No primeiro experimento foi utilizado como agente desinfestante o hipoclorito de cálcio
a 1,5% e 3% em diferentes tempos de imersão: 2,0 min.; 5,0 min. e 8,0 min. O tratamento controle
foi constituído de explantes que não foram desinfestados pelo hipoclorito de cálcio. A assepsia foi
realizada dentro da Câmara de Fluxo Laminar (CFL), onde após o estabelecimento dos tratamentos,
os explantes foram imersos em álcool a 70% durante 1 minuto. Em seguida, os explantes foram
submetidos a três lavagens consecutivas com água destilada e esterilizada para retirada do excesso
de hipoclorito de cálcio e álcool para posterior inoculação. Esta ocorreu em tubos de ensaio com
meio MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962) suplementado com 30 gL -1 de sacarose e 6,5 gL -1 de
ágar. O pH do meio foi ajustado para 5,5 e o meio foi esterilizado em autoclave a uma pressão de 1
atm e temperatura de 120°C, por 20 minutos. Os sete tratamentos foram testados com quatro
repetições. Cada parcela foi constituída por três tubos de ensaio, com um explante em cada.
2. Esterilização do meio de cultura
Após a desinfestação, os brotos jovens de pinhão manso foram inoculados em meio MS
suplementado com 30 g.L -1 de sacarose e 6,5 g.L -1 de ágar, no qual o óleo essencial de Lippia
gracilis Schauer, que possui ação antimicrobiana, foi utilizado para esterilizar o meio de cultura,
dispensando o processo de esterilização em autoclave. Foram adicionadas ao meio as seguintes
concentrações de óleo: 100 μL.L -1 , 200 μL.L -1 , 300 μL.L -1 e 400μL.L -1 (Tratamentos 1, 2, 3 e 4,
respectivamente), no meio do tratamento controle não foi adicionado o óleo essencial e o mesmo foi
esterilizado em autoclave a uma pressão de 1 atm e temperatura de 120°C, por 20 minutos. O pH
do meio de todos os tratamentos foi ajustado para 5,5. A adição do óleo essencial ao meio foi feita
em câmara de fluxo laminar e a inoculação aconteceu uma semana após este procedimento. Cada
tratamento foi composto por quatro repetições, cada uma com três tubos de ensaio, com um
explante cada.
3. Antibiótico como inibidor da contaminação bacteriana
ISBN: 978-85-7621-031-3