Revista Newslab edição 180

CITOMETRIA DE FLUXO
Essa ligação não específica pode
levar a resultados falso-positivos
e dados sem significado. Para
evitar isso, os reagentes de blo-
conhecido por ser negativo em
suas células, ou um anticorpo
secundário sozinho (se estiver
usando anticorpos primários e
tra não estimulada quanto
uma completamente estimulada
são importantes para
determinar tanto os resulta-
queio de Fc bloqueiam os recep-
secundários), podem ser úteis
dos positivos quanto a faixa
tores Fc e garantem que apenas
para determinar a ligação espe-
dinâmica da marcação por flu-
a ligação específica ao antígeno
cífica na marcação intracelular.
orescência, e para confirmar
seja observada.
que o anticorpo está funcio-
Controle biológico
nando conforme o esperado.
Controle de marcação
Deve-se considerar ainda o uso
intracelular
de controles biológicos que
Esse tipo de controle também
A marcação intracelular pode
permitirão determinar a espe-
pode ajudar na escolha do
ser mais problemática do que
cificidade da marcação e as
fluoróforo mais apropriado,
a de superfície, muitas vezes
limitações experimentais. Eles
já que pequenas alterações
devido a níveis mais elevados de
são importantes para todas as
podem ter uma melhor reso-
background dentro das células
marcações, mas especialmente
lução com fluoróforos mais
causados por interações prote-
para a marcação intracelular,
brilhantes. Compreender o
ína-proteína. Como ela requer
que pode apresentar maior
seu experimento e a amostra é
fixação e permeabilização, o
fluorescência de fundo. Os
importante ao escolher o con-
que pode afetar a detecção de
controles incluem amostras
trole biológico adequado.
antígenos, a autofluorescência,
a intensidade do fluoróforo e
a morfologia celular, outros
controles são necessários.
Controles, como uma linha
celular negativa, um anticorpo
conhecidas negativas e amostras
conhecidas positivas.
Para alguns experimentos,
como a medição da liberação
de citocinas, tanto uma amos-
Referências
FMO controls - Flow Cytometry - Service
Centers - UTHealth Houston
All for one and one for all – Fluorescence
Minus One Controls (bitesizebio.com)
Flow Cytometry Basics Guide: Practical Advice
to Get Your Started in Flow Cytometry
- Bio-Rad
Autoras:
Helena Varela de Araújo
Biomédica graduada pela UFRN e pela University of Kent
(Inglaterra). Especialista em Hematologia pelo Hospital
Albert Einstein. Tem MBA em Gestão de Saúde pelo Centro
Universitário São Camilo. Aluna de cursos na área de Marketing
na ESPM. Foi assistente técnica do laboratório de citometria de
fluxo do Whitehead Institute, MIT. Atualmente é supervisora
do laboratório de citometria clínica do Beth Israel Deaconess
- Harvard Medical School. Fundadora do @HemoFlow, maior
página de ensino em citometria de fluxo do Instagram.
Rafaele Loureiro de Azevedo
Bióloga graduada pela Universidade Estácio de Sá,
CRBio/RJ 121828/02-D. Especialista em hematologia
pela Universidade Federal do Rio de Janeiro. Mestre em
Imunobiológicos por BioManguinhos/Fundação Oswaldo
Cruz. Atualmente é analista de inovação e operações
farmacêuticas da Fiocruz/RJ. Tem experiência em
Controle de Qualidade, Citometria de Fluxo e expressão de
anticorpos monoclonais in vitro. É criadora de conteúdo e
professora do @HemoFlow.
Bruna Garcia Nogueira
Farmacêutica graduada pela UnB, CRF/SP 95286.
Especialista em Hematologia pelo Hospital Albert
Einstein, com aperfeiçoamento em Citometria de
Fluxo pelo Hospital das Clínicas da FMUSP. Analista
especializada em citometria de fluxo no Hospital
Albert Einstein. Criadora de conteúdo e professora
do @HemoFlow
Fernanda Vitelli Lins
Formada em Biomedicina pela Universidade
Católica de Brasília, Mestre em Patologia Molecular
pela Universidade de Brasília. Atualmente Flow
Cytometry Senior Specialist no Children's Research
Institute at UT Southwestern Medical Center.
170 Revista NewsLab Edição 180 | Novembro 2023