charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

2. Einleitung
et al. 1998). Basierend auf dieser Vorstellung stabiler Lipiddomänen in einer sonst
fluiden Membran entstand der Begriff der sogenannten „Lipid rafts“ (Simons et al.
1997). Eine präparative Isolation dieser Lipidrafts kann über die Lyse der Membran in
kaltem nicht-ionischem Detergenz (z.B. Triton) und eine anschließende
Dichtezentrifugation erfolgen (Hooper et al. 1999). Membrandomänen mit hohem
Sphingolipid- und Cholesterolanteil können nicht solubilisiert werden, da sie von
starken van-der-Waals-Kräften zusammengehalten werden. Sie sind durch eine
geringe Dichte charakterisiert (enthalten relativ wenige Proteine) und steigen
während der Ultrazentrifugation im Dichtegradienten auf (Hooper et al. 1999).
2.4.3 Phosphatidylinositol (PI)
Da Phosphatidylinositol (PI) das am häufigsten vorkommende Phospholipid und
damit Baustein von biologischen Membranen ist, wird man es bei allen
Untersuchungen, die die Membran betreffen, identifizieren. Es reguliert auf
verschiedenen Ebenen die Struktur und den Stoffwechsel von Zellen. Nach
Phosphorylierung des Phosphatidylinositols entsteht in der Plasmamembran
Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat (PIP2). Durch die Aktivierung eines G-Protein-
gekoppelten Rezeptors wird die membranständige Phospholipase C stimuliert und
spaltet anschließend das Membranlipid PIP2 zu Diacylglycerol und Inositol-1,4,5-
trisphosphat (IP3). Inositol-1,4,5-trisphosphat wird im Zellstoffwechsel durch die IP3-
Phosphatase zu Inositolbisphosphat deaktiviert. Eine weitere Phosphorylierung durch
die IP3 -3-Kinase an der 3-Position, leitet eine Signaltransduktion zu weiteren, höher
phosphorylierten Inositolphosphaten ein, die ebenfalls Funktionen in der Regulation
der Zelle erfüllen können. Inositol-1,4,5-trisphosphat bewirkt über die Bindung an
seinen spezifischen Rezeptor, den IP3-Rezeptor, die Freisetzung von Calcium-Ionen
aus dem endoplasmatischen Retikulum, das als intrazellulärer Calciumspeicher
dient. Die dadurch bewirkte Erhöhung der Konzentration von Calcium im Zytosol hat
vielfältige physiologische Funktionen. Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphat dient
auf der Zytosolseite der Plasmamembran als spezifische Bindungsstelle für
bestimmte Proteine, die an der Organisation des Zytoskeletts beteiligt sind, wie
beispielsweise ILK (2.8.1.1) (Delcommenne et al. 1998) (Persad et al. 2000). Speziell
in Thrombozyten ist die Biosynthese von Arachidonsäure aus Phosphatidylinositol,
welche die Grundlage für das Eicosanoid Thromboxan ist, das wiederum zur
Thrombozyten-Aktivierung führt, essentiell. Auch die Aktivierung der
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