charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

5. Diskussion
werden, dass Thrombozyten keine eNOS/iNOS Transkripte enthalten. Dabei wurde
angenommen, dass die positiven eNOS und iNOS-Signale bei der RT-PCR in
früheren Forschungsarbeiten (Mehta et al. 1995) (Chen et al. 1996) (Freedman et al.
1999) durch Kontaminationen von anderen Blutzellen oder Blutzellbestandteilen in
konventionell aufgereinigten Thrombozyten verursacht werden. Die Ergebnisse der
Arbeit bestätigten diese Annahme, da sie zeigen konnten, dass die eNOS und iNOS
mRNA-Signale aus den bisherigen Aufreinigungsmethoden von Leukozyten-
Kontaminationen herrührten und diese Signale in den nach unserer Methode
aufgereinigten hochreinen Plättchen nicht detektiert werden konnten (Gabaryan et al.
2008). Entsprechende Daten konnten auch für die Proteine eNOS und iNOS gezeigt
werden. Auch die standardmäßig in der Literatur verwendete Methode der
Immunopräzipitation führte aus den hochreinen Plättchen zu keinem Nachweis von
eNOS in Thrombozyten, während die entsprechende Positivkontrolle aus HUVEC-
Zellen eine immense Anreicherung des Proteins zeigte (I. Birschmann, personal
communication).
Die zweite Möglichkeit zur Anwendung der hochreinen Plättchen konnte im Rahmen
der vorliegenden Arbeit gezeigt werden. Dazu wurde ein wichtiger Signalweg in
Thrombozyten untersuchten und die Anwesenheit von zwei, in Blutplättchen neu
identifizierten, Proteinen dieses Signalweges bestätigt PINCH und �-Parvin sind
Komponenten des sogenannten IPP-Komplexes (2.7.2), welcher bisher in C2C12
Mauszellen und humanen 293 embryonalen Nierenzellen (Zhang et al. 2002)
ausführlich beschrieben wurde. In Thrombozyten ist dieser Signalweg für die
Aggregation verantwortlich (5.3). Diese Funktion ist abhängig vom
Oberflächenrezeptor Integrin �IIb�3, welcher durch intrazelluläre Signale („inside-out
signaling“) aktiviert wird, die zu einer Modifikation der Integrin-Konformation und
einer Fibrinogenbindung führen. Der besetzte Rezeptor wiederum sendet ein Signal
zurück in die Zelle („outside-in signaling“), was eine zytoskeletale Modifikation, eine
Multikomplex-Bildung und ein Integrin-Clustering zur Folge hat (Law et al. 1996)
(Payrastre et al. 2000). Ein Protein, das an der Regulation von Integrinen beteiligt ist,
ist ILK (integrin-linked kinase) (2.7.1.1). Während ILK in Thrombozyten bereits
beschrieben ist (Pasquet et al. 2002), sind die zwei weiteren Proteine des IPP-
Komplexes, �-Parvin (Martens et al. 2005) (Dittrich et al. 2006) und PINCH (Garcia
et al. 2004) (Martens et al. 2005) (Dittrich et al. 2006), bisher nur in Hochdurchsatz-
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