charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

w/w
0,200
0,180
0,160
0,140
0,120
0,100
0,080
0,060
0,040
0,020
0,000
Albumin/Thrombozytenprotein
** p < 0.01 *** p < 0.001
VB TK
4. Ergebnisse
WP PP
Abbildung 4-5: Serumprotein-Kontamination. Stellvertretend für alle Blutplasmaproteine wurde der
durchschnittliche Wert (n=8) des häufigsten Serumproteins Albumin in der Standard-Präparation von
gewaschenen Plättchen (WP) im Vergleich zur Präparation von hochreinen Plättchen (PP) sowohl aus
Vollblut (VB) als auch aus Thrombozyten-Konzentraten (TK) nephelometrisch gemessen. Dargestellt
ist der Gehalt an Albumin pro Thrombozytenprotein. Die Fehlerbalken zeigen den Standardfehler des
Mittelwertes an.
Da Verunreinigungen durch Leukozyten-Proteine und -mRNA ein Hauptproblem von
Proteom- und Transkriptom-Studien an Thrombozyten sind, wurde großer Wert auf
eine Validierung des Aufreinigungsprotokolls hinsichtlich geringster
Leukozytenkontaminationen gelegt. Zu diesem Zweck wurde das standardisierte
LeucoCount-Set der Firma BD biosciences, Heidelberg (3.8.2) als wirksame und
empfindliche Methode des quantitativen Nachweises der Restleukozyten mit dem
Durchflusszytometer angewandt. Die Probenröhrchen enthalten eine vorgegebene
Menge an Referenzpartikel, anhand derer die absolute Anzahl der Restleukozyten
bestimmt werden kann. Die genaue Leukozytenzahl wird durch eine Berechung aus
den Referenzpartikeln und dem Probenvolumen ermittelt. Diese Methode ermöglicht
die exakte Quantifizierung von Leukozyten bis zu einer Grenze von 5 Zellen/100 µl
Probenvolumen (Dzik et al. 1997) (van der Meer et al. 2001).
Während bei der Präparationen von washed platelets nach bisherigen Methoden,
471,5 ��110,6 Leukozyten pro 10 8 Thrombozyten gemessen wurden, konnten nach
der neuen Aufreinigungs-Technik lediglich 21,9 ��8,5 Leukozyten pro 10 8
Thrombozyten nach Isolation aus Vollblut detektiert werden (Abb. 4-6). Für
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