charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

3. Material und Methoden
3.7.12 Elektrophoretische Trennung von DNA-Fragmenten in Agarose-Gelen
Die Auftrennung von DNA-Fragmenten erfolgte durch Horizontal-Elektrophorese in
1,5 %igen Agarose-Gelen. Die Agarose wurde in 1× TBE-Puffer (3.4) unter Zusatz
von Ethidiumbromid (200 µg/l) durch Aufkochen gelöst und, nach Abkühlen auf 60°C,
in eine Gießvorrichtung mit einem Probenkamm gegossen. Nach Auspolymerisieren
des Gels wurde die zu untersuchende DNA-Probe mit 5× DNA-Probenpuffer (3.4)
versetzt und in einem Gesamt-Volumen von 12,5 µl in die Probentaschen des
Agarose-Gels aufgetragen. Die Elektrophorese wurde bei Raumtemperatur bei 120 V
in 1× TBE-Puffer durchgeführt. Als DNA-Größenstandard wurden, je nach Größe des
zu erwartenden Fragments, 4 µl „GeneRuler TM 100 bp DNA Ladder Plus“
(Fermentas, St Leon-Roth) bzw. „GeneRuler TM 1kb DNA Ladder“ (Fermentas, St.
Leon-Roth) verwendet.
Abb. 2-4: GeneRuler TM 100 bp DNA Ladder #SM0242, Abb. 2-5: GeneRuler TM 1 kb DNA Ladder
Fermentas GmbH, St. Leo-Rot, Deutschland #SM0344, Fermentas GmbH, St. Leon-
Rot, Deutschland
3.7.13 Aufreinigung von PCR-Produkten
Die Reinigung der PCR-Produkte von Primern, Nukleotiden, Polymerase und Salzen
wurde mit Hilfe des MinElute PCR Purification Kits (3.1) vorgenommen. Die
Durchführung wurde nach den Empfehlungen des Herstellers mittels des PCR
Purification Spin Protokolls für Mikrozentrifugen vorgenommen.
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