charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

4. Ergebnisse
Abbildung 4-1: Reinheitskontrolle nach Aufreinigung von Hillmann et al. Das Agarosegel zeigt
die Reinheitsüberprüfung der cDNA aus aufgereinigten Plättchen mittels PCR und der genspezifischen
Primer vWf (Thrombozyten-Marker), CD15, CD45 und HLA-DQ� (Leukozyten-Marker).
Zur Validierung wurde jeweils eine Wasserkontrolle auf das Gel aufgetragen.
Ein Schwerpunkt dieser Arbeit war der systematische Vergleich zwischen
unterschiedlichen Protokollen zur Gewinnung reiner Thrombozyten. Hierbei wurden
humanes Blut von freiwilligen Spendern sowie Thrombozyten-Konzentrate
verwendet. Bewertet wurden die Protokolle hinsichtlich ihrer Fähigkeit, die
Thrombozyten effektiv von den restlichen Blutzellen zu depletieren. Die
Qualitätskontrolle erfolgte mittels mikroskopischer (Erythrozyten), nephelometrischer
(Serumproteine), FACS-Analyse und mRNA-Nachweis (Leukozyten). Gewaschene
Plättchen wurden durch mehrere Zentrifugationsschritte isoliert, in HEPES/NaCl-
Puffer resuspendiert und anschließend in einem diskontinuierlichen Dichte-
Gradienten separiert. Um die ideale Gradientenlösung zur Auftrennung von
Blutkomponenten zu erhalten, wurden unterschiedliche Dichten und Volumina der
Gradientenlösung getestet und die Effektivität sowohl von einem kontinuierlichen als
auch von einem diskontinuierlichen Gradienten überprüft. Der diskontinuierliche
Gradient (3.8.1) war in diesem Vergleich die effektivste Methode um eine
größtmögliche Ausbeute an Thrombozyten mit der geringsten Kontamination an
Serumproteinen, Erythrozyten und Leukozyten zu erhalten (Nr. 5 Abb. 4-2).
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