charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

5. Diskussion
hervorrufen wird, neue Erkenntnisse zu erlangen. Die Forscher untersuchten
diabeteserkrankte Mäuse mit Hilfe der „Lipidomics“-Methode. Hierbei analysierten sie
die genaue Lipidzusammensetzung im Herzmuskelgewebe der Mäuse und fanden
heraus, dass die Herzen der diabetischen Mäuse große Mengen an Cardiolipin
verlieren. Dieses Phospholipid ist ein wichtiger Baustein der Herzmuskulatur und
unterstützt u.a. die Pumpfunktion des Herzens. Sie fanden weiterhin heraus, dass die
Veränderungen beim Cardiolipin deutlich eher auftreten als andere Kardiomyopathie-
typische Anzeichen, wie die Einlagerung schädlicher Fettdepots in die
Herzmuskulatur. Somit wäre es denkbar, dass das Cardiolipin zukünftig als Marker
für die frühzeitige Diagnostik einer diabetischen Kardiomyopathie verfügbar ist (Han
et al. 2007).
Um thrombozytäre Membranen während meiner Arbeit näher untersuchen und
charakterisieren zu können, wurden hochreine Plättchen mittels Glycerolgradienten
und osmotischen Lyse aufgeschlossen (3.8.7). Zur Abtrennung von weiteren
Zelldebris wurde das Lysat unter einen Sucrose-Dichte-Gradienten geschichtet und
nach erfolgter Zentrifugation konnte anhand der SDS-PAGE eine deutliche
Auftrennung der aufgereinigten Membranfragmente in zwei eindeutige Fraktionen
festgestellt werden (4.2). Wie aus der Abbildung 4-9 hervorgeht, konnte anhand des
membranintegralen Proteins Integrin �3, welches in der Plasmamembran von Zellen
lokalisiert ist, eine definitive Aussage über die Verteilung der Membranfragmente im
Gradienten getroffen werden. Denn es war zu erkennen, dass sich in den Fraktionen
2 und 3, die zusammengeführt wurden und im Folgenden als Fraktion 2/3 bezeichnet
werden, eine deutlich höhere Konzentration an Integrin �3 nachweisen ließ als in den
Fraktionen 9 und 10, im Folgenden Fraktion 9/10 genannt. Diese Tatsache deutete
darauf hin, dass sich in der Fraktion 2/3 die Fragmente der Plasmamembran
angereichert hatten, wohingegen die Membranfragmente in der Fraktion 9/10
hauptsächlich von intrazellulären Membranen stammen mussten, da diese geringere
Mengen an Integrin �3 enthielten.
Für die Annahme, dass sich im Dichtegradienten Plasmamembran-Fragmente und
Organellenmembran-Fragmente aufgetrennt haben, sprach zusätzlich die Verteilung
des Proteins ILK, welches, wie bereits in Kapitel 2.8.2 beschrieben wurde, an der
Zytoskelett-Organisation beteiligt ist. Hierbei ist es in einem Komplex mit weiteren
Proteinen über das Integrin �3 an der Plasmamembran in aktivierten Thrombozyten
lokalisiert. Durch diese Tatsache lässt sich erklären, dass ILK im Western-Blot in der
86