charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

4. Ergebnisse
Abb. 4-17A: PINCH assoziiert mit ILK in vivo in humanen Plättchen. Die hochreinen Plättchen wurden
mit verschiedenen Agonisten stimuliert und anschließend lysiert. Der 100.000 × g Überstand wurde
mit PINCH-, ILK-Antikörpern und Maus IgG immunopräzipitiert. Die Eluate wurden einer SDS-PAGE
und anschließender Western-Blot Analyse mit Antikörpern gegen ILK, PINCH und P-Selektin
unterzogen. Als Positiv-Kontrolle für den P-Selektin-Nachweis wurde Lysat aus gewaschenen
Plättchen aufgetragen. Als Negativ-Kontrolle wurden ungekoppelte Dynabeads ® mit Lysat aus
hochreinen Plättchen inkubiert.
Abb. 4-17B: Der 100.000 × g Überstand wurde auf VASP Phosphorylierung (VASP-P Ser157 , VASP-
PP
Ser239 ) mittels der Western-Blot Methode hin untersucht. Funktionelle Integrität und die Kapazität der
Thromboyztenmembanrezeptoren wurden anhand der Thrombozytrenrezeptor-regulierten VASP-
Phosphorylierung analysiert
Es wurden aliquote Mengen an Protein für jede Probe auf die SDS-PAGE-Gele aufgetragen (20
µg/Spur).
Nach der Detektion von ILK und PINCH in Thrombozyten sollten anschließend neue
Proteine identifiziert werden, die mit den IPP-Komplex-Komponenten in Plättchen
interagieren. Um weitere neue Protein-Protein-Interaktionen in Thrombozyten zu
identifizieren, konnte im Rahmen dieser Arbeit eine weiterführende Methode gezeigt
werden. Zu diesem Zweck wurden die Immunopräzipitations-Proben von ILK und
PINCH auf ein SDS-Polyacrylamid-Gel aufgetragen und das Gel anschließend
mittels Silberfärbung angefärbt (Abb. 4-18).
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