charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

4. Ergebnisse
Um unspezifische Bindungen an die beads bzw. die konstanten IgG’s ausschließen
zu können, wurden als Negativkontrolle Maus-IgG-gekoppelte Dynabeads
verwendet. Da das Protein ILK eine Größe von 59 kDa hat und die Maus IgG’s 55
kDa groß sind, wurde zur eindeutigen Detektion die Immunopräzipitation von ILK mit
einem Antikörper aus Maus durchgeführt und im Western-Blot schließlich mit einem
ILK-Antikörper aus Ziege detektiert. Zunächst ließ sich erkennen, dass, unabhängig
von einer Stimulation der Thrombozyten, eine Bindung von ILK und PINCH an die
jeweils mit entsprechendem Antikörper gekoppelten Dynabeads ® stattgefunden hatte
(Abb. 4-17A rote Kreise). Weiterhin ließen sich Interaktionen von ILK-gekoppelten
beads mit PINCH und von PINCH-gekoppelten beads mit ILK nachweisen (Abb. 4-
17A grüne Kreise). Diese endogenen Interaktionen konnte sowohl in unstimulierten
als auch in ADP- oder TRAP-stimulierten Plättchen nachgewiesen werden (Abb. 4-
17A). Um sicherzustellen, dass die Proteine im Eluat aus dem Zytosol stammten und
nicht membrangebunden waren, wurden die Eluate auf das Vorhandensein von P-
Selektin hin analysiert.
Die Funktionelle Integrität der Thromboyzten-Plasmamembanrezeptoren wurde, wie
von Geiger et al. 1999 beschrieben, analysiert (Geiger et al. 1999). Die Stimulation
und Inhibition der VASP-Phosphorylierung durch PGI2 und ADP, weisen auf die
funktionelle Integrität des PGI2- und P2Y12 ADP Rezeptors hin (Abb. 4-17B).
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