charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

5. Diskussion
Zellorganellen handelt, weil eine selektive Anreicherung von Phosphatidylinositol
nachgewiesen werden konnte.
Wie bereits erwähnt, konnte zum einen mittels immunobiochemischer
Untersuchungen im Western-Blot gezeigt werden, dass in der Fraktion 9/10 ein
größerer Anteil des IP3-Rezeptors vorhanden war, was auf die Membran des
endoplasmatischen Retikulums schließen lässt. Zum zweiten wurde durch die
Lipidomics-Analyse die Phosphatidsäure (PA) in höherer Konzentration detektiert,
die den Grundbestandteil aller Glycerolphosphatide bildet und durch ein
Kettenverlängerungssystem im endoplasmatischen Retikulum synthetisiert wird
(Karlson et al. 1994). Und zum dritten ließ sich ein größerer Gehalt an PI
identifizieren, welches ein Precursor von Phosphoinositiden ist und in erster Linie im
endoplasmatischen Retikulum synthetisiert wird, um anschließend zu anderen
Membranen mittels vesikulärem Transport gebracht zu werden (Di Paolo et al. 2006).
All diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass mit dieser Aufreinigungsmethode,
basierend auf einer Kombination aus Gradienten, eine äußerst effektive Methode zur
Anreicherung des Thrombozyten-ER’s entwickelt wurde.
Da Arachidonsäure aus Phosphatidylinositol synthetisiert wird und sie die Grundlage
für das Eicosanoid Thromboxan ist, welches zur Thrombozyten-Aktivierung führt,
stellt das PI in Thrombozyten eine essentielle Komponente bei einer physiologisch
intakten Thrombozyten-Aggregation dar. In früheren Studien wurde bereits gezeigt,
dass aus der Zugabe von 0,1 µM/ml Thrombin, welches in der Lage ist eine
komplette Thrombozyten-Aktivierung zu bewirken, die Synthese von 0,5 nmol
Thromboxan B2/10 9 Thrombozyten resultiert. Daher lässt sich vermuten, dass die
intrazellulären Thrombozytenmembranen eine adäquate Versorgung an PI für die
Synthese von Thromboxan während der Thrombozyten-Aktivierung gewährleisten
(Lagarde et al. 1982). Weiterhin ist das Phosphatidylinositol in Thrombozyten an der
Signaltransduktion zur Regulation des Ca 2+ -Haushaltes beteiligt. Nach
Phosphorylierung in der Plasmamembran entsteht aus Phosphatidylinositol
Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat und durch die Phospholipase C wird dieses zu
Inositol-1,4,5-trisphosphat (IP3) und Diacylglycerin gespalten. Die anschließende
Bindung des Inositol-1,4,5-trisphosphates an den IP3-Rezeptor im
endoplasmatischen Retikulum bewirkt die Öffnung der Ca 2+ -Kanäle in dessen
Membran, wodurch das gespeicherte Ca 2+ ins Zytosol freigesetzt wird und die dortige
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