charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

4.1.2 Hochreine Plättchen sind immer noch funktionell
4. Ergebnisse
Neben der außergewöhnlichen Reinheit der Thrombozyten, die durch diese neue
Aufreinigungsmethode erzielt werden kann, ist ein weiterer wichtiger Aspekt die
Beibehaltung der Funktionalität der Thrombozyten für funktionelle Analysen nach der
Aufreinigung. Um diese nachzuweisen wurde eine P-VASP-Untersuchung
durchgeführt (Geiger et al. 2005). Dieser „Enzym Immuno-Assay“ (EIA) bestimmt
gleichzeitig phosphoryliertes VASP und Gesamt-VASP. VASP, das abundant in
humanen Thrombozyten vorkommt, ist ein Substrat der cGMP-abhängigen
Proteinkinase (cGK) und der cAMP-abhängigen Proteinkinase (PKA) und kann
genutzt werden, um den Aktivierungs-Status von Thrombozyten zu bestimmen
(Schwarz et al. 1999) (Geiger et al. 2005) (Aleil et al. 2005). Durch die Inkubation von
Thrombozyten mit dem Prostacyclin-Analogon Iloprost, welches den IP-Rezeptor
aktiviert, steigt die intrazelluläre Konzentration von cAMP und die PKA-Aktivität und
infolgedessen die VASP-Phosphorylierung. Die Zugabe von ADP, welches den
P2Y12-Rezeptor aktiviert, gleicht den Effekt des Prostaglandins durch Inhibierung der
Adenylatcyclase und damit die PKA-Aktivität aus, was wiederum zur
Dephosphorylierung von VASP führt (Geiger et al. 2005).
Abbildung 4-8: Schematische Darstellung des VASP-Signalweges in Thrombozyten
AC – Adenylatcyclase, ADP – Adenosindiphosphat, cAMP – cyclic Adenosinmonophosphat, Gi –
G-Protein inhibitory, Gs – G-Protein stimulatory, IP - Prostazyklin-Rezeptor, P2Y12 - P2Y
purinoceptor 12, PG-E1 - Prostaglandin E1, PKA - cAMP-abhängige Protein Kinase A, P-VASP –
phosphoryliertes VASP, VASP - vasodilator-stimuliertes Phosphoprotein
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