charakterisierung von organellen und signalwegen des thrombozyten

5 Diskussion
5.1 Generierung von hochreinen Plättchen
5. Diskussion
Ein Ziel dieser Arbeit war es, eine zuverlässige Technik zur Herstellung von
hochreinen Plättchen zu entwickeln, welche anschließend für Protein- oder mRNA-
Analysen verwendet werden können. Die Methode sollte in allen biologischen Labors
durchführbar sein, auch wenn keine Thrombozyten-Konzentrate zur Verfügung
stehen. Da die Aufreinigung von Thrombozyten von steigender Relevanz für die
neuen Proteom- und Transkriptom-Techniken ist, die einen sehr hohen
Reinheitsgrad der Proben für valide Ergebnisse erfordern, hat das „Platelet
Physiology Subcommittee der ISTH Scientific Standardisation Committee (SSC)„
explizit darauf hingewiesen, dass die Reinheit der Thrombozyten wichtig für
Hochdurchsatzverfahren wie massenspektrometrische Analysen oder SAGE ist
(Watson et al. 2005).
Um die Probleme der Aufreinigung anzugehen, wurden bisher verschiedene
Techniken, wie laserunterstützte Mikrodissektion und Manipulation (Fink et al. 2003),
serielle Filtration und Gel-Filtration (Bugert et al. 2003) (Gnatenko et al. 2003) (Rox
et al. 2004) und Antikörper-vermittelte Depletion von Leukozyten mittels
Magnetbeads (Bugert et al. 2003) (Gnatenko et al. 2003) (Fink et al. 2003) (Hillmann
et al. 2006) durchgeführt. Filtration wird allgemein in Labors genutzt, die die
Möglichkeit haben Thrombozyten-Konzentrate über die Transfusionsmedizin zu
beziehen, da diese einen höheren Anteil an Blutplättchen aufweisen als das gleiche
Volumen an Vollblut. Denn durch die Filtration geht ein großer Anteil an
Thrombozyten verloren, so dass eine dementsprechend hohe Menge an
Blutplättchen eingesetzt werden muss, um eine, für weiterführende Versuche
erforderliche Anzahl an Thrombozyten nach der Filtration zu behalten. Somit hat die
Methode der Filtration zum einen den Nachteil, dass sie nach einer sehr hohe Menge
an Thrombozyten als Ausgangsmaterial verlangt, zum zweiten, dass während der
Filtration die Thrombozyten teilweise aktiviert werden können und zum dritten, dass
auch weiterhin Kontaminationen durch andere Blutzellen und Serumproteine in den
aufgereinigten Proben vorhanden sind, was wir während unserer Arbeit
nachgewiesen haben (Birschmann*, Mietner* et al. 2008).
Für die im Rahmen dieser Arbeit neu entwickelte Aufreinigungsmethode ist bereits
eine relativ geringe Menge an Vollblut ausreichend. So ergibt die Aufreinigung von
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