Lebenslauf - OPUS - Universität Würzburg
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3. Material und Methode<br />
entsprechenden Medium ausgelagert werden, um ihren pH-Wert auf einen neutralen<br />
Wert anzuheben. Dafür wurden die nun sterilen Prüfkörper in den Glasschalen unter<br />
der Sterilbank mit autoklaviertem PBS-Medium (500 ml) vollständig bedeckt und<br />
nach jeweils 24 h das Medium gewechselt. Nach 7 Tagen stellte sich ein pH-Wert<br />
von ca. 7-7,5 ein. Danach wurde der Überstand mittels einer Pasteurpipette<br />
abgesaugt und die Prüfkörper nochmals autoklaviert (HA und Ag-HA) bzw. für 60 min<br />
sterilisiert, wobei sie nach 30 min gedreht wurden (Bruschit und Ag-Bruschit).<br />
Abschließend wurden sie einen Tag offen unter der Sterilbank zum Trocknen<br />
ausgelegt. Nach vollständiger Trocknung erfolgte die Lagerung in steril<br />
verschlossenen Glasschalen.<br />
3.2.8 Bakterienkultivierung<br />
Einfrieren der Keime zur Lagerung<br />
Die Bakterienstämme Staphylococcus aureus und Staphylococcus epidermidis<br />
wurden bei -18 °C gelagert. Zuerst wurden einzelne Kolonien der Keime von einer<br />
Kulturplatte mit einer ausgeglühten Sonde abgeschabt. Diese Kolonien wurden dann<br />
im LB-Nährmedium 24 h bei 37 °C bebrütet. Danach wurden 0,3 ml der angesetzten<br />
Kulturen mit 0,7 ml Medium und 5% Glyzerin in ein Eppendorf-Reaktionsgefäß<br />
gegeben und maximal 6 Monate bei -18 °C gelagert.<br />
Herstellung der Übernacht-Kultur<br />
Zur Kultivierung der Bakterien wurde pro Bakterienstamm je ein 10 ml PP-Röhrchen<br />
mit 10 ml LB-Medium und je eines mit 10 ml LB-Natriumnitrat-Medium befüllt.<br />
Daraufhin wurde jeweils 20 µl der entsprechenden Bakteriensuspension mittels einer<br />
Eppendorf-Pipette in die PP-Röhrchen hinzugegeben. Diese wurden nun für 24 h bei<br />
37 °C im Schüttler bebrütet.<br />
Herstellung der Vorkultur und Beimpfen der Prüfkörper<br />
Dafür wurde in je ein 40 ml PP-Röhrchen pro Bakterienstamm 38 ml LB-Medium<br />
bzw. 38 ml LB-Natriumnitrat-Medium gefüllt und 2,7 ml der jeweiligen Übernacht-<br />
Kultur hinzupipettiert. Diese wurden wiederum für 2 h bei 37 °C im Schüttler bebrütet.<br />
Währenddessen wurden die 24-Well-Platten mit den Prüfkörpern bestückt. Pro<br />
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