Lebenslauf - OPUS - Universität Würzburg

3. Material und Methode
Beschichtung fixiert, entwässert und getrocknet.
3.2.12.1 Fixierung und Entwässern der besiedelten Prüfkörper
Die Fixierung der Bakterien erfolgte 24 h nach Beimpfen der Prüfkörper, die
Fixierung der Osteoblasten 5 Tage nach deren Aussaat.
Dazu wurden die mit den Prüfkörpern bestückten 24-Well-Platten auf Eis gestellt und
3 x für je 1 min mit PBS gewaschen und anschließend für 15 min mit 6,25%igem
Glutaraldehyd in PBS auf Eis fixiert. Im Anschluss wurden die Zellen bzw. Bakterien
nochmals 5 x 5 min in PBS auf Eis gewaschen.
Die Dehydrierung der Proben erfolgte hierauf bei Raumtemperatur durch eine auf-
steigende Acetonreihe. Dazu wurden die Prüfkörper in lösungsmittelbeständige
Glasschalen überführt und 15 min in 30 %, 20 min in 50 %, 30 min in 75 % sowie 45
min in 90 % Aceton eingelegt. Zur vollständigen Entwässerung wurden die Präparate
5 x für 30 min in 100 % Aceton inkubiert. Bis zu Weiterverarbeitung wurden die
Präparate bei Raumtemperatur in 100 % Aceton gelagert.
3.2.12.2 Kritisch-Punkt-Trocknung
Nach der Entwässerung folgte die Kritisch-Punkt-Trocknung der Prüfkörper mittels
des Critical Point Dryer CPD C 30 (Fa. Bal-Tec). Dazu wurden die Präparate in eine
auf ca. 9 °C gekühlte und mit 100% Aceton gefüllte Kammer eingebracht. Diese
wurde verschlossen und mit flüssigem CO2 aufgefüllt. Das Aceton wurde durch 10-
maliges Ablassen und wieder Auffüllen durch flüssiges Kohlenstoffdioxid ersetzt.
Anschließend wurden die Präparate auf 40-42 °C erhitzt. Bei 31 °C war der kritische
Punkt des CO2 erreicht und es schlug spontan von der flüssigen in die gasförmige
Phase um. Nachdem das Gas langsam abgelassen wurde, konnten die Prüfkörper
entnommen werden und auf den Probenhaltern fixiert werden.
Nun folgte noch die bereits oben beschriebene Goldbedampfung im Goldbestäuber
Emitech K550 (Fa. Emitech) für 2 x 4 min.
Anschließend wurden die Präparate im Rasterelektonenmikroskop bei einer
Vergrößerung von 500 oder 1000 analysiert.
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