[FullText] Công Phá Sinh 2 - Phạm Thị Thanh Thảo - LoveBook

- Tế bào cho: là những tế bào chứa gen cần chuyển (vi khuẩn, thực vật,
động vật).
- Tế bào nhận: vi khuẩn, tế bào thực vật (tế bào chồi, mầm), tế bào động vật
(như tế bào trứng, phôi).
- Enzyme: gồm enzym cắt giới hạn và enzyme nối.
- Enzyme cắt giới hạn (restrictaza): cắt hai mạch đơn của phân tử ADN ở
những vị trí nucleotit xác định.
- Enzyme nối (ligaza): tạo liên kết phosphodieste làm liền mạch ADN, tạo
ADN tái tổ hợp.
- Thể truyền (véc tơ chuyển gen): Là phân tử ADN có khả năng tự nhân đôi,
tồn tại độc lập trong tế bào và mang gen từ tế bào này sang tế bào khác, thể
truyền có thể là các plasmid, virut hoặc một số NST nhân tạo như ở nấm
men.
- ADN tái tổ hợp là một phân tử ADN nhỏ được lắp ráp từ các đoạn ADN
từ các phân tử khác nhau (thể truyền và gen cần chuyển).
2. Quy trình tạo ADN tái tổ hợp
a. Tạo ADN tái tổ hợp
- Tách chiết thể truyền và gen cần chuyển ra khỏi tế bào.
- Xử lí bằng một loại enzim giới hạn (restrictaza) để tạo ra cùng 1 loại đầu
dính.
- Dùng enzim nối để gắn chúng tạo ADN tái tổ hợp.
b. Đƣa ADN tái tổ hợp vào tế bào nhận
- Dùng muối CaCl2 hoặc xung điện cao áp làm dãn màng sinh chất của tế
bào để ADN tái tổ hợp dễ dàng đi qua màng.
c. Phân lập dòng tế bào chứa ADN tái tổ hợp
- Để nhận biết được các tế bào vi khuẩn nào nhận được ADN tái tổ hợp thì
các nhà khoa học thường sử dụng thể truyền là các gen đánh dấu chuẩn hoặc
các gen đánh dấu nhờ đó ta có thể dễ dàng nhận biết được sự có mặt của các
ADN tái tổ hợp trong tế bào.
- Bằng các kỹ thuật nhất định nhận biết được sản phẩm đánh dấu.
- Phân lập dòng tế bào chứa gen đánh dấu.