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in vitro en día 4 (estadios 5-8 y 8-16 células) al útero de receptoras sincronizadas. Las
receptoras que no fueron transferidas recibieron solamente un medio de cultivo (falsa
transferencia). En día 8 se recobraron los embriones con FU, o bien solamente el FU
(figura 1).
Figura 1. Recogida de fluido uterino
Todas las muestras (embriones y FU) se almacenaron a -80º C hasta su análisis
proteómico. Los tratamientos se repitieron cada 2-3 meses y cada receptora se trató
en cuadrado latino, recibiendo o no embriones. Según los embriones recobrados se
dan tres tipos de respuesta en las receptoras: 1/ algún embrión recobrado está vivo;
2/ ningún embrión recobrado está vivo; 3/ no se recobran embriones.
Análisis del Proteoma.
Los análisis del proteoma de las muestras se están efectuando mediante
Electroforesis Diferencial Bidimensional acoplado a espectrometría de masas (DiGE-
MS) con la técnica de saturación de residuos de cisteína, la cual permite una alta
sensibilidad y capacidad de detección de proteínas a baja concentración. Se han
puesto a punto dos tipos de análisis:
DiGE con FU. Se analiza el proteoma del FU de modo diferencial para distinguir
proteínas que pueden ser producidas por el útero materno en presencia de embriones.
En todas las muestras de FU, analizadas hasta el momento, la concentración de
proteína (mini-Bradford; 240 µg mínimo de proteína/ alícuota) ha sido suficiente para
realizar los análisis DiGE-MS de acuerdo con las expectativas del proyecto.
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