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mediante RFLP del ADN mitocondrial, obteniendo perfiles de restricción distintos para
ambas cepas.
Con los distintos cebadores se obtuvieron diferentes patrones de amplificación,
mostrando sus perfiles genéticos una gran diversidad tanto en el número de
polimorfismos como en sus tamaños moleculares. En todas las especies estudiadas se
observó que el microsatélite (GAC)5 generó un mayor número de bandas, con la
excepción de las cepas identificadas como D. bruxellensis, para las que el
oligonucleótido OPA-03 produjo mayor polimorfismo. Se obtuvo una gran variabilidad,
entre los perfiles genéticos, en función de la especie y del cebador utilizado (Tabla 2).
Tabla 2. Variabilidad genética de las distintas especies.
M.
pulcherrim
a
C.
parapsilopsi
s
H.
osmophil
a
H.
uvaru
m
H.
valbyensi
s
Cebado Variabilidad (%)
r
OPA03 58,2 52,4 48,8 80,3 38,0 77,8
RM13 96,4 54,8 78,0 89,4 36,4 44,4
GTG 72,7 78,6 65,9 87,9 80,2 94,4
GAC 90,9 88,1 87,8 72,7 92,0 83,3
OPA-03 98,2 85,7 92,7 98,5 73,8 88,9
y RM13
TODOS 98,2 97,6 95,1 98,5 98,4 88,9
D.
bruxellensi
s
Para encontrar las posibles similitudes entre cepas se utilizó el paquete
estadístico NTSY, aplicando el algoritmo de Jaccard y visualizando su agrupamiento
mediante análisis cluster. No se encontraron agrupamientos comunes entre cepas con
los distintos oligonucleótidos ensayados.
Las similitudes obtenidas con el OPA-03, entre las 18 cepas de la especie
Dekkera, agrupan en tres clusters a siete cepas con una similitud del 100%, mientras
que el microsatélite (GAC) 5 aglutina a cinco cepas en dos grupos con el mismo nivel
de agrupamiento (Figura 2).
Los cebadores OPA-03 y RM13 generaron mayores agrupamientos entre las
cepas identificadas como C. parapsilopsis. Para ambos oligonucleótidos la variabilidad
detectada fue próxima al 50%. El dendograma obtenido con el cebador RM13 da lugar
a cinco grupos de levaduras que poseen una similitud del 100%. No obstante, las
cepas que presentan iguales perfiles genotípicos muestran disimilitud respecto a las
actividades enzimáticas. Para los cebadores (GAC) 5 y (GTG) 5 se obtuvieron menores
agrupamientos y, por lo tanto, una mayor variabilidad genética.
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