1 (US Patent No. US D560281 (S1); US D5601344 (S1); US ...

El virus de la Influenza A y de la Influenza B pueden detectarse en muestras respiratorias de humanos por una variedad de
métodos que incluyen el cultivo tisular, las pruebas de inmunofluorescencia y el inmunoensayo enzimático. El aislamiento
en cultivo tisular continúa siendo la prueba de referencia para la detección del virus de la influenza; sin embargo, el
procedimiento puede a veces tomar hasta siete días en completarse. 1 Las pruebas que usan anticuerpos
inmunofluorescentes tienen una sensibilidad moderada, pero depende mucho de la calidad y preparación de la muestra. La
detección rápida de la influenza mediante inmunoensayos enzimáticos e inmunoensayos con micropartículas se ha
convertido en un aspecto importante en el manejo de pacientes de todas las edades con enfermedad respiratoria aguda por
causa de influenza. 1,3,4 Los resultados de dichas pruebas se utilizan para apoyar los datos obtenidos durante la evaluación
clínica del paciente, y para ayudar al médico a determinar el curso de acción.
PRINCIPIOS BIOLOGICOS
La prueba TRU FLU es un ensayo inmunocromatográfico de un sólo uso que consiste de un Tubo con Conjugado, una Tira
de Prueba y un Diluyente de Muestra. El Tubo con Conjugado contiene una perla liofilizada con anticuerpos monoclonales
contra el virus de la influenza A y contra el virus de la influenza B (anticuerpos detectores) ligados a oro coloidal. La tira de
prueba tiene una membrana de nitrocelulosa con anticuerpos de captura secos contra el virus de la influenza A y el virus de
la influenza B, en líneas separadas. El soporte para la Tira de Prueba tapa el Tubo con Conjugado durante la prueba, y
disminuye la exposición a microorganismos potencialmente patógenos cuando éste se desecha.
Antes de añadir la muestra del paciente, se rehidrata la perla conjugada en el Tubo con Conjugado añadiéndole Diluyente
de Muestras. Luego de añadir la muestra y antes de añadir la Tira de Prueba se mezcla el contenido en el tubo. Puesto
que el test se incuba entre 20-25 C, si los antígenos de la influenza A o de la influenza B están presentes en la muestra
diluida, éstos se unirán al conjugado correspondiente de anticuerpo monoclonal-oro coloidal a medida que la muestra se
mueve a través de la Tira de Prueba. El anticuerpo monoclonal de captura influenza A está ligado a la tira de prueba en la
posición test- FLU A del dispositivo. Cuando éste liga el complejo antígeno- anticuerpo influenza A-oro coloidal genera una
línea visible de color Rosado a Rojo. De manera similar, el anticuerpo monoclonal de captura influenza B ligado a la
membrana de la prueba en la posición test- FLU B generará una línea de color Rosado a Rojo cuando captura complejos
antígeno- anticuerpo influenza B –oro coloidal. Cuando no hay antígeno presente no se forman complejos y no aparecerá
ninguna línea Rosada a Roja ni en la posición test FLU A ni en la posición test FLU B de la Tira de Prueba. Una línea de
control interno ayuda a determinar si hubo o no hubo flujo adecuado a través de la tira de prueba durante una corrida de la
prueba. Una línea Rosada-Roja en la posición Control de la Tira de Prueba deberá estar presente cada vez que se analiza
una muestra o un control. Si no se ve una línea de control Rosada-Roja la prueba se considera inválida.
REACTIVOS/MATERIALES PROPORCIONADOS
El número máximo de pruebas que se puede obtener con este equipo está anotado en el exterior de la caja.
1. Tira de Prueba: Una tira de prueba adherida a un soporte plástico que viene dentro de una bolsa metálica con
desecante. La tira de prueba trae anticuerpos monoclonales de captura* anti-influenza A y anti-influenza B para las
líneas de test y un anticuerpo anti-murino de cabra para un control. El soporte se usa para tapar el Tubo con
Conjugado durante la prueba. La porción en forma de paleta del soporte indica el lugar donde deben aparecer las
líneas de test y de control. Almacene la bolsa entre 2 y 25 C cuando no la esté usando.
2. Tubo con Conjugado: Un tubo plástico con tapón que contiene una perla de conjugado. El tubo viene dentro de una
bolsa metálica con desecante. El conjugado consiste de anti-influenza A y anti-influenza B conjugados con oro, los
cuales sirven como anticuerpos de detección.* Almacene la bolsa metálica entre 2 y 25 C cuando no lo esté usando.
No lo almacene en el congelador. No remueva la tapa antes de usarlo.
3. Diluyente de Muestra / Control Negativo: Una solución proteica tamponada provista en un vial plástico. Azida de
Sodio al 0,094% añadido como agente preservante. Listo para usar. Almacene entre 2 y 25 C cuando no se esté
usando.
4. Pipetas plásticas para transferencia con marcas de graduación para volúmenes de 100, 200 y 300 µL como se
muestra en el diagrama de abajo.
5. Rótulos para el Tubo con Conjugado TRU FLU (para distinguir los Tubos con Conjugado TRU FLU de Tubos con
Conjugado de otras pruebas).
*Las cepas de influenza que se usaron para producir los anticuerpos monoclonales incorporados en las tiras de prueba y el
conjugado fueron A/Texas, A/H1N1, B/Singapore y B/Beijing/184/93.
MATERIALES NO PROPORCIONADOS
1. Guantes de látex desechables para manejar las muestras de las vías respiratorias como si éstas fueran
potencialmente infecciosas
2. Agitador mecánico vorticial (vórtex) para suspender la muestra en Diluyente de Muestra; opcional
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