Cancer du sein et micro-environnement tumoral: rôle de la protéase ...

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la souris obèses. Enfin, linhibition de lexpression du LRP1 par la technique de lARNinterférence, a mis en évidence le rôle majeur de ce récepteur dans ladipogenèse. En absencede LRP1, les cellules ne se différencient plus, naccumulent plus de triglycérides etnexpriment plus les marqueurs adipocytaires PPAR, aP2 et HSL. Nos études suggèrent quecette absence daccumulation de triglycérides nest pas due à une augmentation de la lipolysemais à linhibition de ladipogenèse. Pour compléter notre étude, nous avons inhibélexpression du LRP1 dans les adipocytes matures. En absence de LRP1, le contenu entriglycérides est significativement diminué et la lipolyse basale est augmentée. Sachant queLRP1 participe à lincorporation dacides gras précurseurs des triglycérides, il est possibleque lextinction de lexpression du LRP1 dans ladipocyte mature induise une stimulation dela lipolyse des triglycérides pour le maintien énergétique de ladipocyte. Ces derniers résultatsconfirment le rôle du LRP1 dans le maintien du contenu en triglycérides des adipocytes,comme suggéré par les études réalisées sur les souris avec invalidation de LRP1 dans lesadipocytes matures (Hofmann et al., 2007; Terrand et al., 2009).PERSPECTIVESLensemble de ces travaux apporte de nouvelles informations quant à limplication dela cath-D et de son récepteur LRP1 dans la différenciation adipocytaire et dans la biologie deladipocyte normal et obèse. Ces données suggèrent que ces deux protéines seraient des ciblespotentiellement intéressantes dans le traitement de lobésité. Cependant, des étudescomplémentaires devront être réalisées afin de mieux comprendre leur fonction dans labiologie de ladipocyte ainsi que dans le micro-environnement tumoral.I Rôle de la cath-D et du LRP1 dans la biologie de ladipocytePour compléter ce travail, il serait intéressant de déterminer si leffet de la cath-D surle processus adipogénique est contrôlé par son activité protéolytique. Les travaux impliquantdes protéases dans la différenciation des adipocytes indiquent une action extra-cellulaire via leremodelage et la dégradation de la matrice extra-cellulaire, mais également une action intracellulaire.Pour cela, des expériences de ré-expression de cath-D pourraient être réalisées dans les clonesshRNA cath-D que nous avons générés dans la lignée adipocytaire F442A. Nous avons ànotre disposition au laboratoire, des vecteurs codants pour la cath-D sauvage ou une forme70
mutée dépourvue dactivité catalytique. La ré-expression de ces deux formes de la protéasedans nos clones permettrait de déterminer si les cellules sont à nouveau capables de sedifférencier, et si lactivité de la cath-D est nécessaire à la différenciation des adipocytes.Lajout direct dans le milieu de culture de cath-D recombinante inactive (forme 52 kDa) ouactive (forme 51 kDa) pourrait apporter des informations supplémentaires sur leffet de lacath-D sécrétée dans la différenciation des adipocytes. Même si la cath-D nécessite unenvironnement acide pour cliver ses substrats, il est décrit que la cath-D sécrétée clive laprolactine à pH physiologique et ce clivage est dépendant des pompes à protons et deséchangeurs de cations présents sur la membrane plasmique (Piwnica et al., 2006). Dans cettemême étude, il a été rapporté que le proN peptide, qui correspond à la partie N-terminale dupropeptide de la cath-D, lie le site actif de la cath-D à pH neutre ou légèrement acide (Fuseket al., 1991; Lee et al., 1998; Piwnica et al., 2006; Wittlin et al., 1999). Il en résulte uneinhibition de lactivité catalytique de la cath-D. Lutilisation de pepstatine A et du proNpeptide dans le milieu de culture des pré-adipocytes permettrait de déterminer si lactivitécatalytique de la cath-D est nécessaire à ladipogenèse.Enfin, le développement de souris knock-out pour la cath-D dans les adipocytes permettraitdétudier le rôle de cette protéase dans le tissu adipeux in vivo. Une étude morphologique dutissu adipeux ainsi que des analyses portant sur lhoméostasie énergétique (assimilation deslipides, tolérance au glucose, ) de ces souris pourrait être réalisées.Concernant le LRP1, son mode daction est complexe et peut passer par :1- lendocytose de certaines molécules,2- lactivation des voies de signalisation par phosphorylation de résidus tyrosines présents sursa queue cytoplasmique,3- la protéolyse intra-membranaire régulée (RIP) qui génère un fragment intra-cellulaire quiira au noyau pour réguler la transcription génique.Il sera important de déterminer le mécanisme daction du LRP1 impliqué dans ladifférenciation des adipocytes en présence ou en absence de cath-D.II Rôle de la cath-D et du LRP1 adipocytaires dans le micro-environnement tumoralLes travaux accomplis durant cette thèse mettent en évidence le rôle de la cath-D et deson récepteur LRP1 dans les adipocytes et leur implication dans ladipogenèse. Toutefois, ilserait intéressant dapprofondir ces recherches en axant nos travaux futurs en cancérologie.Des études épidémiologiques indiquent que lobésité est un facteur de risque pour denombreux cancer. Cependant les mécanismes par lesquels lobésité participe au processus71
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Université Montpellier I UFR Méd
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Un grand merci à tous mes collabor
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TitleBreast cancer and tumoral micr
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C. PRESENTATION DU TRAVAIL DE THESE
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Cette synthèse de novo a lieu dans
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. Les facteurs de transcriptionLa d
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Lexpression de C/EBP est quant à e
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les cath-B et L, en une forme matur
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Il existe deux RM6P : le RM6P/IGFII
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. Dans les pathologiesEn plus de se
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La cath-D joue donc un rôle import
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Une fois le marquage des peptides e
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Afin de réaliser ce projet, nous a
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RésuméLaspartyl protéase catheps
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