Cancer du sein et micro-environnement tumoral: rôle de la protéase ...

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Afin de réaliser ce projet, nous avons utilisé deux modèles cellulaires développés aulaboratoire (Figure 18) :1- des fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) immortalisés exprimant ou pas la cath-Dhumaine ou la cath-D humaine mutée au niveau du site catalytique et donc protéolytiquementinactive. Ces trois lignées cellulaires ont déjà été publiées (Laurent-Matha et al., 2005).2- des cellules de cancer du sein (MDA-MB-231) transfectées de façon stable avec un shRNAciblant le gène de la luciférase ou celui de la cath-D. Ces cellules de cancer du sein exprimentou pas la cath-D.Lutilisation de cette technique peut sembler ne pas être appropriée à létude des substratsendogènes de la cath-D car cette dernière a besoin dun pH acide pour cliver ses substrats.Pourtant, il a été décrit lexistence de formes actives de la cath-D dans le milieu extracellulairecapables de cliver la prolactine du côté basal des acini de la glande mammaire(Castino et al., 2008). De plus, les travaux de Piwnica en 2006 suggèrent que la cath-Dsécrétée cliverait la prolactine à lextérieur de la cellule, mais que ce clivage nécessite uneacidification locale qui passerait par des pompes à protons et des échangeurs de cationsNa + /H + . Par ailleur, il est possible que le clivage de protéines par la cath-D se fasse àlintérieur de la cellule et que les produits de dégradations soient relargués par exocytose. Unedes hypothèses serait que la pro-cath-D sécrétée lie son substrat et que ce complexe soitinternalisé. La vésicule dendocytose devenant acide la cath-D cliverait son substrat et sesproduits de dégradation seraient relargués dans le milieu extra-cellulaire. Nous avons doncappliqué cette technique à nos deux modèles cellulaires, les travaux sont en cours.52
AB cathD-/- MEFcath-D cath-D-/- MEF D231N cath-D MDA-MB-231shLuc shcath-D1 shcath-D2P2 P3 P6 P2 P3 P6 P2 P3 P6cath-Dbactincath-D D231N cath-DFigure 18 : Expression de la cath-D dans différents modèles cellulairesA) Des fibroblastes embryonnaires de souris immortalisés (MEF) déficientes en cath-D ont ététransfectés avec de la cath-D humaine ou de la cath-D humaine mutée au niveau de son sitecatalytique. Il existe une différence dun 1 kDa au niveau de la masse moléculaire apparente de lacath-D mutée qui est due à une augmentation de la mobilité électrophorétique de la protéine mutée.B) Des cellules de cancer du sein, les MDA-MB-231, ont été transfectées à laide de shRNA ciblant legène de la luciférase (shLuc) ou le gène de la cath-D (shcath-D1 et shcath-D2). Dans les cellulestransfectées avec le shRNA ciblant le gène de la cath-D, lexpression de la cath-D est très fortementinhibée.53
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la souris obèses. Enfin, linhibiti
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carcinogénique sont encore mal con
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Ce travail de thèse a étudié, po
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REFERENCESAhima, R. S. (2006). Adip
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implicates them as antigen presenti
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Xiao, Y., Junfeng, H., Tianhong, L.
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F. ANNEXE98
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Cathepsin D is a new ligand for ext
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INTRODUCTIONLysosomal aspartic prot
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pcDNA3.1(+)Myc-tagged LRP1b into pc
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(Protein refolding kit, Novagen) fo
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not secrete detectable levels of pr
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using cath-D-/- MEF transfected wit
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REFERENCES1. Vignon, F., Capony, F.
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RésuméLaspartyl protéase catheps
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