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Annexe 3Technique d’obtention du sérum um à partir tir duplasma et préparation de la solution d’AlseverOBTENTION DU « SERUM » A PARTIR DU PLASMA CITRATE AU MOYEN DE CHLORURE DECALCIUM ET DE KAOLINPréparation de la solution de kaolin1 Dissoudre 10 g de CACl 2.2H 2O et 1 g de MgCI 2.6H 2O dans 400 ml d’eau fraîchement distillée oudésionisée.2 Ajouter 5 g de kaolin (silicate d’alumine hydraté colloïdal) et compléter à 100 ml avec de l’eaudistillée.3 Conserver à 4°C jusqu’à utilisation.Obtention du « sérum »1 Mesurer le volume de plasma et le porter dans un bécher en verre propre.2 Mettre le bécher contenant le plasma au bain-marie à 37°C.3 Agiter (avec un agitateur magnétique si possible) et porter dans le bécher 1 ml de solution dekaolin bien mélangée pour 100 ml de plasma ainsi que 0,1 g d’azoture de sodium pour 100 ml deplasma.4 Une fois le caillot formé, agiter encore pendant une heure.5 Enlever l’agitateur, couvrir le bécher et conserver une nuit à 4°C.6 Recouvrir un bécher propre avec une gaze, fixée par un ruban adhésif, et filtrer le sérum obtenu. Lecaillot peut être pressé pour obtenir le plus grand volume possible de sérum.7 Filtrer le sérum obtenu dans un récipient stérile au moyen d’un filtre de 0,45 µ, de 0,2 µ, sipossible.Le sérum ainsi obtenu peut être conservé jusqu’à un an à 4°C.PREPARATION DE LA SOLUTION D’ALSEVER MODIFIEEDestinée uniquement à la conservation in vitro des hématies.Produits• Acide citrique à une molécule d’eau 0,5 g• Dextrose 19,0 g• Chlorure de sodium 4,2 g• Citrate de trisodium à 2 molécules d’eau 8,0 g• Sulfate de néomycine 0,5 g• Chloramphénicol 0,33 g53
ANNEXE 3Méthode1 Dissoudre l’acide citrique, le dextrose, le chlorure de sodium et le citrate de trisodium dans 600ml d’eau fraîchement distillée ou désionisée.2 Introduire le chloramphénicol et le sulfate de néomycine. Bien mélanger.3 Compléter à 1000 ml avec de l’eau distillée ou désionisée.4 Répartir dans des flacons stériles et conserver à 4°C.Les hématies lavées peuvent être mises en suspension à 1 – 10 % dans la solution d’Alsever etconservées à 4°C. Ces hématies peuvent être utilisées quatre semaines pour les tests in vitro ; on devratoutefois vérifier par des contrôles appropriés que les antigènes sont encore viables.54
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