PhD download - hirc.botanic.hr, Department of Botany, Faculty of ...

istraživača (Damboldt 1965, Eddie i Ingrouille 1999), prema kojima su specifičnekarakteristike cvijeta jako važne u determinaciji vrste gube i postaju neprepoznatljiveklasičnim herbariziranjem. Na žalost, većinu vrsta sakupljenih (ljubaznošću kolega)izvan prostora Hrvatske nije bilo moguće transporitirati drugačije nego u oblikuherbarskog materijala, te je stoga pet populacija uključeno u morfometrijskoistraživanje prethodno herbarizirano, kao što je naznačeno u Prilogu 5. Usporedbenamorfometrija cvjetova tako u konačnici obuhvaća tri izofiloidne vrste (dvije agregataWaldsteiniana, jednu Pyramidalis), devet heterofilnih i dvije izofilne.Prvobitna namjera bila je u svakoj populaciji uzeti uzorke s po 20 odraslih i sasvimzdravih jedinki (po dva sasvim rascvjetana cvijeta), međusobno dovoljno udaljenih dase može pretpostaviti kako ne predstavljaju klonsku populaciju, kako bi uzorak bioujednačen. Međutim, s obzirom na to da su pojedine populacije bile vrlo malobrojne,te su kao takve i zaštićene u sklopu nacionalnih parkova ili parkova prirode, od togsam pravila povremeno morala i odstupati. Tako je najmanja populacija zastupljena sasamo dvije jedinke (dva cvijeta), a dvije najveće s po 24 cvijeta, te ukupni uzorak zamorfometrijsku analizu nije mogao biti ujednačen. U svakom slučaju, populacija se priuzorkovanju nastojala što manje oštećivati, odnosno uzimalo se samo onoliko uzoraka(cvijet, list, bazalne reznice) koliko ne šteti daljnjem životu jedinke, a samo je do petprimjeraka po populaciji herbarizirano (voucher).Biljni materijal za DNA analizuU središtu DNA istraživanja našle su se ukupno 23 vrste (tablica u Prilogu 5)zvončića iz ciljnog podučja primorskih Dinarida, ali i šire, koje predstavljaju nekolikoevolucijskih linija roda Campanula. DNA analiza usmjerena je na zvončiće«izofiloidnih» agregata (u smislu Geslota 1984) Waldsteiniana (Campanulawaldsteiniana, C. tommasiniana) i Pyramidalis (C. pyramidalis), izofilne vrste serije (usmislu Trinajstića 1978) Garganicae, te izbor heterofilnih vrsta iz agregata Rotundifolia(uglavnom ovisno o dostupnosti materijala) primorskih Dinarida i srednje Europe. Kaokontrolna uključena je vrsta Edraiantus tenuifolius.Ukupne stanične DNA izolirane su iz lisnih tkiva istraživanih svojti. Do 100 mgodraslih i sasvim zdravih listova s iste biljke odstranjeno je pincetom i pohranjeno uplastičnu vrećicu ili u silika-gel (samo kad je terensko istraživanje bilo višednevno),ako je bilo moguće na prirodnom lokalitetu, kad i cvjetovi za morfološka mjerenja.20