Revista Newslab Edição 179

CITOMETRIA DE FLUXO
permite obter a melhor
resolução, ou seja, o volume
do anticorpo que gera
melhor separação entre
as populações positiva e
negativa para aquele marcador
(Figura 1).
Geralmente cada anticorpo
tem um volume
indicado em sua bula,
mas quase sempre é
muito maior do que
você realmente precisa.
O que acontece é
que esse excesso de
anticorpo pode ligar-se
a outros epítopos não
específicos, gerando
maior background, “falsos-negativos”.
Figura 1: Histograma mostrando o um anticorpo conjugado ao fluorocromo FITC.
Observamos uma população positiva e uma população negativa.
Os dados obtidos a partir
de cada diluição são
analisados usando um
software apropriado de
citometria de fluxo, onde
é possível plotar a intensidade
média de fluorescência
(MFI) em histogramas.
Podemos calcular
de duas maneiras:
• Signal-to-noise ratio
(S/N): para calcular o
S/N, diminui-se do MFI
da população positiva
o MFI da população
negativa. Dessa maneira,
quanto maior o S/N,
maior será a resolução.
Cálculos na Titulação
de Anticorpos
Para determinar a concentração
ótima do anticorpo,
são realizados
cálculos de titulação.
216 Revista NewsLab Edição 179 | Setembro 2023