Bedeutung des C-reaktiven Proteins im Rahmen maligner ...

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bis sechs Wochen postoperativ ein weiterer CRP-Wert im Plasma eruiert, welcher mit dem
präoperativen Wert verglichen wurde.
2.6 Zellkultur
2.6.1 Zellkulturmedien und Reagenzien
� Fetal Calf Serum (FCS), hitzeinaktiviert bei 60 °C über 30 min (Biochrom)
� RPMI 1640 with L-Glutamine (Gibco BRL, Karlsruhe)
� IMDM Bio Whittaker TM , Iscove´s Modified Dulbecco´s Medium with 25 mM Hepes,
Cambrex Bio Science, Verviers, Belgium
� Biocoll Separating Solution (Biochrom)
� Interleukin-1α, Tumornekrosefaktor-α (Tebu, Frankfurt a. M.)
� Interleukin-6 (Serva, Heidelberg)
� Lipopolysaccharid (Sigma)
� Phosphate buffered saline (PBS) w/o Ca 2+ , Mg 2+ , pH 7,2 (Biochrom)
� Tryptanblau (Sigma)
2.6.2 Tumorzelllinien
Durch die freundliche Bereitstellung in vitro gezüchteter Tumorzellen durch das Institut für
Immunologie (PD Dr. med. C. Frohn) und der Klinik für Urologie wurden unten genannte
Zelllinien der molekularbiologischen und immunhistochemischen Untersuchung auf eine
nachweisbare CRP-Expression unterzogen. Dabei wurde mit folgenden Tumorzellstämmen
gearbeitet:
1. Caki
2. SK-RC 35
3. SK-RC 47
4. SK-RC 58
Die kultivierten Zellen wurden an der sterilen Werkbank bei Raumtemperatur
weiterverarbeitet. Hierzu wurde das überstehende Medium aus der Kulturflasche abgesaugt
und zusätzlich mit PBS (Phosphate buffered saline) ausgespült. Nach Zugabe von Trypsin,
wurden die Zellen für ca. 5 Minuten im Brutschrank bei 37 °C inkubiert. Trypsin bewirkte
eine Ablösung der Zellen, so dass diese Zellsuspension anschließend in ein
Zentrifugenröhrchen, welches 10 ml FCS (Fetal Calf Serum) enthält, überführt werden
konnte. Zugabe von FCS und Auffüllen mit PBS auf 50 ml bewirkte eine Inaktivierung des