(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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하이브리도마 클론을 분석한다. 양성 하이브리도마 클론으로 마우스를 면역화하여 일반적으로 고수준의 항체를
함유하는 복수액을 생산할 수 있다.
또 다른 양태에서, 항체 생산성 무한증식된 하이브리도마를 면역화된 동물로부터 제조할 수 있다. 면역화 후,
동물을 희생시키고 당업계에 익히 공지된 바와 같이 무한증식된 골수종 세포와 비장 B 세포를 융합시킨다[참조:
Harlow and Lane의 상기 문헌). 특정 양태에서, 골수종 세포는 면역글로불린 폴리펩타이드를 분비하지 않는다
(비분비성 세포주). 융합 및 항생제 선택 후, IL-1β, 또는 이의 부분 또는 IL-1β 발현 세포를 사용하여 하이
브리도마를 선별한다. 특정 양태에서, 효소 결합 면역분석법(ELISA) 또는 방사선면역분석(RIA)을 사용하여 초
기 선별을 수행한다. ELISA 선별의 예는 국제 특허 출원 공보 제WO 00/37504호에 제시되어 있다.
항-IL-1β 항체 생산성 하이브리도마를 선택하고, 클로닝하고, 하기에 추가로 논의된 바와 같이 왕성한 하이브
리도마 성장, 높은 항체 생산 및 바람직한 항체 특성을 포함한 바람직한 특성을 위해 추가로 선별한다. 동계
동물, 면역계 결핍 동물, 예를 들면, 누드 마우스에서 생체내에서 또는 시험관내 세포 배양에서 하이브리도마를
배양 및 증대시킬 수 있다. 하이브리도마를 선택, 클로닝 및 증대시키는 방법은 당업자에게 익히 공지되어 있
다.
한 양태에서, 하이브리도마는 마우스 하이브리도마이다. 또 다른 바람직한 양태에서, 하이브리도마를 래트,
양, 돼지, 염소, 소 또는 말과 같은 비-사람 또는 비-마우스 종에서 생산한다. 또 다른 양태에서, 하이브리도
마는 사람 하이브리도마이고, 사람 비분비성 골수종을 항-IL-1β 항체 발현 사람 세포와 융합시킨다.
특정 에피토프를 인식하는 항체 단편을 공지의 기술로 수득할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 Fab 및 F(ab')2
단편을 파파인(Fab 단편을 생산함) 또는 펩신(F(ab')2 단편을 생산함)과 같은 효소를 사용한 면역글로불린 분자
의 가단백분해적 절단에 의해 생산될 수 있다. F(ab')2 단편은 가변 영역, 경쇄 불변 영역 및 중쇄 CH1 도메인
을 함유한다.
2. SLAM을 사용한 항-IL-1β 단클론 항체
본 발명의 또 다른 양태에서, 재조합 항체는 미국 특허 공보 제5,627,052호, 국제 특허 출원 공보 제WO
92/02551호 및 문헌[참조: Babcook, et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7843-7848]에 기재된 바와
같이, 선택된 림프구 항체 방법(SLAM)으로서 당업계에 언급된 절차를 사용하여 분리된 단일 림프구로부터 생산
된다. 본 방법에서, 목적하는 항체를 분비하는 단세포, 예를 들면, 면역화된 동물로부터 유래된 림프구는 항원
특이적인 용혈 플라크 검정법을 사용하여 선별되는데, 이러한 검정법에서는 비오틴과 같은 링커를 사용하여 항
원 IL-1β 또는 이의 단편을 양의 적혈구 세포에 커플링시킨 뒤 IL-1β에 대한 특이성이 있는 항체를 분비하는
단세포를 확인하는데 사용한다. 목적하는 항체 분비 세포를 확인한 후, 역전사효소 PCR에 의해 상기 세포로부
터 중쇄 및 경쇄 가변 영역 cDNA를 수득하고, 이어서 적절한 면역글로불린 불변 영역(예를 들면, 사람 불변 영
역)의 맥락에서 COS 또는 CHO 세포와 같은 포유동물 숙주 세포에서 이들 가변 영역을 발현시킬 수 있다. 이어
서, 생체내 선별된 림프구로부터 유래된 증폭 면역글로불린 서열로 형질감염된 숙주 세포를, 예를 들면, 형질감
염된 세포를 패닝(panning)하여 IL-1β에 대한 항체를 발현하는 세포를 분리함으로써 추가로 분석하고 시험관내
선택할 수 있다. 증폭 면역글로불린 서열은 국제 특허 출원 공보 제WO 97/29131호 및 제WO 00/56772호에 기재
된 바와 같은 시험관내 친화성 성숙화 방법에 의해 추가로 시험관내 조작될 수 있다.
3. 유전자 이식 동물을 사용한 항-IL-1β 단클론 항체
본 발명의 또 다른 양태에서, 항체는 사람 면역글로불린 유전자좌의 일부 또는 전부를 포함하는 사람을 제외한
동물을 IL-1β 항원으로 면역화하여 제조된다. 한 양태에서, 사람을 제외한 동물은 사람 면역글로불린 유전자
좌의 대형 단편을 포함하고 마우스 항체 생산이 결핍된 유전자 조작 마우스 계통인 XENOMOUSE
공개특허 10-2012-0104542
유전자 이식 마우스이다[참조: Green et al., (1994) Nature Genet. 7: 13 21; 미국 특허 공보
제5,916,771호, 제5,939,598호, 제5,985,615호, 제5,998,209호, 제6,075,181호, 제6,091,001호, 제6,114,598호
및 제6,130,364호; 국제 특허 출원 공보 제WO 91/10741호, 제WO 94/02602호, 제WO 96/34096호, 제WO 96/33735
호, 제WO 98/16654호, 제WO 98/24893호, 제WO 98/50433호, 제WO 99/45031호, 제WO 99/53049호, 제WO 00/09560
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