(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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실시예 3: 사람 IL-1β 항체의 기능 확인
실시예 3.1: IL-1β 효소 결합된 면역흡착 검정 프로토콜
항-IL-1β mAb가 사람 IL-1β에 결합하는지를 측정하기 위해, ELISA 플레이트(Nunc, MaxiSorp, Rochester, N
Y)를 피어스 코트 완충액(Pierce Coat buffer) 중에 2㎍/ml로 희석된 항-사람 Fc 항체(Jackson
Immunoresearch, West Grove, PA)와 함께 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 플레이트를 세척 완충액(0.05%의 트
윈 20을 함유하는 PBS)으로 5회 세척하고, 웰당 슈퍼블록 차단 완충액(Thermo scientific, #37515) 200㎕로 25
℃에서 1시간 동안 차단하였다. 플레이트를 태핑(tapping)하여 차단 완충액을 제거하고, 10% 슈퍼블록 및 0.5%
트윈 20을 함유하는 PBS 중의 2㎍/ml의 항체 각각을 웰당 100㎕로 웰에 첨가하고 25℃에서 1시간 동안 항온처리
하였다. 웰을 1XPBST로 5회 세척하고, 1㎍/ml의 비오틴화된 항원을 1:6 연속 희석액으로 적정하였다(10% 슈퍼
블록 및 0.05% 트윈 20을 함유하는 PBS 중의 pg 내지 ㎍의 범위 동안). 이어서, 항원의 각각의 희석액을 플레
이트에 첨가하고 25℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 웰을 1XPBST로 5회 세척하고, polyHRP 스트렙타비딘
(KPL #474-3000, Gaithersburg, MD)과 함께 25℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 웰을 1XPBST로 5회 세척하
고, ULTRA-TMB ELISA(Pierce, Rockford, IL) 100㎕를 각각의 웰에 첨가하였다. 발색 현상에 따라, 반응을 1N
HCl로 정지시키고, 450nM에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 표 9에 나타내며, 수치는 사람 IL-1β에 대한
사람 항-IL-1β 항체의 결합을 나타낸다.
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공개특허 10-2012-0104542