(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel
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VH4-59로부터 유래된 사람 항체에서 상기 제안된 역돌연변이의 발생률을 측정하기 위해, VH4-59로부터 유래된<br />
사람 VH 서열을 NCBI IgBlast 데이터베이스로부터 배치 파스타 파일(batch fasta file)에 다운로드하고,<br />
ClustalW로 정렬하고, 로고바(logobar)로 가시화하였다. 갭, 신호 펩타이드, CDR3 대부분 및 불변 영역 서열을<br />
제거하기 위해 output.eps 파일을 Adobe Illustrator로 편집하였다. 이러한 분석은 상기 제안된 역돌연변이 및<br />
마우스 VH CDR 잔기가 VH4-59로부터 유래될 수 있는 825개의 천연 사람 항체에서 제시되었는지를 이해하는데 유<br />
용하였다. 9개의 제안된(G27F, I29L, I48L, V67L, V71K, T73N, N76S, F78V 및 R94K) 역돌연변이 중에서,<br />
G27F, I29L, V67L, N76S, F78V 및 R94K는 이들 서열의 1% 이상에서 관찰되었다.<br />
2개의 I<strong>12</strong>V 및 V29F VH3 골격 공통 변화로부터 0 내지 2개를 갖는 모든 조합에서 10개의 제안된 역돌연변이 중<br />
에서 1 내지 9개를 갖는 세트 2의 서열은 면연원성 가능성이 덜하거나, VH3-53 생식계열 서열로부터의 자연 발<br />
생 사람 VH 서열과 전반적으로 가장 좋은 동일성을 갖는 추가의 사람화된 1B<strong>12</strong>VH 서열을 생성하기 위해 이루어<br />
질 수 있다. VH3-53로부터 유래된 사람 VH 서열을 NCBI IgBlast 데이터베이스로부터 배치 파스타 파일에 다운<br />
로드하고, ClustalW로 정렬하고, 로고바로 가시화하였다. 갭, 신호 펩타이드 및 불변 영역 서열을 제거하기 위<br />
해 output.eps 파일을 Adobe Illustrator로 편집하였다. 이러한 분석은 상기 제안된 역돌연변이 및 마우스 VH<br />
CDR 잔기가 VH3-53으로부터 유래될 수 있는 174개의 천연 사람 항체에서 제시되었는지를 이해하는데<br />
유용하였다. 10개의 제안된(A24V, F29L, V37I, V48L, S49G, F67L, R71K, N76S, L78V 및 R94K) 역돌연변이 중<br />
에서, A24V, F29L, R71K, N76S, L78V 및 R94K는 이들 서열의 1% 이상에서 관찰되었다.<br />
VL 서열에서 루프 구조 및 VH/VL 경계면을 지지하는 잔기는 국제 특허 출원 공보 제WO 2008/021156호에 요약되<br />
어 있다. CDR 또는 골격 잔기를 "X"로 점진적으로 대체하여 4개의 추가의 VL 서열(1B<strong>12</strong>VLx, 1B<strong>12</strong>VLxx,<br />
1B<strong>12</strong>VLxxx 및 1B<strong>12</strong>VLxxxx)을 생성하였다. 1B<strong>12</strong>VL은 J 영역이 제거된 VL 서열이다. Vector NTI<br />
소프트웨어의 Align X 프로그램으로 5개의 서열을 사람 Vk 서열과 나란히 정렬하였다. 2-1-1 정준 CDR 구조를<br />
갖는 사람 Vk 생식계열 서열만을 고려하였다. 1B<strong>12</strong>.4H4 VL 사람화를 위한 수용체 골격으로서 사람 Vk 생식계열<br />
1-33/018을 선택하였다. 상이한 하위그룹으로부터 사람화를 위한 백업 수용체 골격으로서 사람 Vk 생식계열<br />
6D41/A14를 선택하였다. 모든 사람 Vk1 생식계열 서열을 정렬하여, 면역원성 가능성을 최소화하기 위해 Vk1 공<br />
통 서열로 변화되어야 하는 1-33/018의 잠재적인 골격 잔기를 확인하였다. 2개의 Vk1 공통 서열 변화(F73L 및<br />
I83F)가 확인되었다. 이러한 변화는 사람화된 1B<strong>12</strong>VL 서열의 면역원성 가능성을 최소화하였다. 6D41/A14에 대<br />
하여 동일한 분석을 수행하지 않았는데, 이는 Vk6 하위그룹에서 2개의 상이한 생식계열 서열만이 존재하였기 때<br />
문이다.<br />
I83F Vk1 공통 서열 변화가 있거나 없는 모든 조합에서 7개의 제안된 역돌연변이(I2T, M4V, A43P, Y49S, G64S,<br />
D1E 및 Q3T) 중에서 1 내지 6개를 갖는 세트 1의 추가의 서열은 더 좋은 IgG 기능, 덜한 면연원성 가능성, 또는<br />
O18 생식계열 서열로부터의 자연 발생 사람 VL 서열과 전반적으로 더 좋은 동일성을 달성하기 위해 이루어질 수<br />
있다. 모든 조합에서 7개의 제안된 역돌연변이(V2T, M4V, A43P, K49S, G64S, D1E 및 V3T) 중에서 1 내지 6개<br />
를 갖는 세트 2의 추가의 서열은 더 좋은 IgG 기능, 덜한 면연원성 가능성, 또는 6D41/A14 생식계열 서열로부터<br />
의 자연 발생 사람 VL 서열과 전반적으로 더 좋은 동일성을 달성하기 위해 이루어질 수 있다.<br />
1-33/O18로부터 유래된 사람 Vk 서열을 NCBI IgBlast 데이터베이스로부터 배치 파스타 파일에 다운로드하고,<br />
ClustalW로 정렬하고, 로고바로 가시화하였다. 갭, 신호 펩타이드 및 불변 영역 서열을 제거하기 위해<br />
output.eps 파일을 Adobe Illustrator로 편집하였다. 이러한 분석은 상기 제안된 역돌연변이 및 마우스 VH<br />
CDR 잔기가 1-33/O18로부터 유래될 수 있는 260개의 천연 사람 항체에서 제시되었는지를 이해하는데<br />
유용하였다. 7개의 제안된 역돌연변이 중에서, D1E 및 Y49S는 이들 서열의 1% 이상에서 관찰되었다.<br />
실시예 2.2.2: 항-사람 IL-1β 단클론 항체 1B<strong>12</strong>.4H4의 사람화<br />
표 5에 기재된 항-IL-1β 항체 1B<strong>12</strong>.4H4 유래의 중쇄 CDR 서열을 2개의 사람 골격에 컴퓨터 모의실험으로(in<br />
silico) 이식시켰다. 제1 세트는 mAb h1B<strong>12</strong>VH.1z, h1B<strong>12</strong>VH.1 및 h1B<strong>12</strong>VH.1a를 포함한다. h1B<strong>12</strong>VH.1z는 VH4-<br />
59 및 JH4 골격 서열을 포함하는 CDR 이식된 사람화된 1B<strong>12</strong> VH이다. h1B<strong>12</strong>VH.1은 N 말단 파이로글루타메이트<br />
형성을 방지하기 위해 Q1E 골격 변화를 추가로 도입한 사람화된 디자인이다. h1B<strong>12</strong>VH.1a는 Q1E 변화 및 모든<br />
가능한 골격 역돌연변이(G27F, I29L, I48L, V67L, V71K, T73N, N76S, F78V 및 R94K)를 포함하는 사람화된 디자<br />
인이다.<br />
공개특허 10-20<strong>12</strong>-0104542<br />
제2 세트는 mAb h1B<strong>12</strong>VH.2z, h1B<strong>12</strong>VH.2 및 h1B<strong>12</strong>VH.2a를 포함한다. h1B<strong>12</strong>VH.2z는 VH3-53 및 hJH4 골격 서열을<br />
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