(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel
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실시예 2.2.3: 사람화된 항체의 작제<br />
상기 서열은 표준 DNA 합성 또는 증폭 기술을 사용하여 핵산을 합성하고, 세포에서 발현시키기 위해 표준 재조<br />
합 DNA 기술을 사용하여 목적하는 항체 단편을 발현 벡터에 조립하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 핵산 코돈<br />
은 아미노산 서열로부터 결정되며, 올리고뉴클레오타이드 DNA는 Blue Heron Biotechnology, Inc.<br />
(www.blueheronbio.com)(Bothell, WA USA)에 의해 합성된다. 올리고뉴클레오타이드를 300 내지 2000개 염기쌍<br />
의 이본쇄 DNA 단편으로 조립하고, 플리스미드 벡터에 클로닝하고, 서열 확인한다. 효소적 과정을 사용하여 클<br />
로닝된 단편을 조립하여 완전한 유전자를 수득하고 발현 벡터에 서브클로닝한다[참조: 미국 특허 공보 제<br />
7,306,914호, 제7,297,541호, 제7,279,159호, 제7,150,969호; 및 미국 특허 출원 공보 제2008/0115243호, 제<br />
2008/0102475호, 제2008/0081379호, 제2008/0075690호, 제2008/0063780호, 제2008/0050506호, 제2008/0038777<br />
호, 제2008/0022422호, 제2007/0289033호, 제2007/0287170호, 제2007/0254338호, 제2007/0243<strong>19</strong>4호, 제<br />
2007/0225227호, 제2007/0207171호, 제2007/0150976호, 제2007/0135620호, 제2007/0<strong>12</strong>8<strong>19</strong>0호, 제2007/0104722<br />
호, 제2007/0092484호, 제2007/0037<strong>19</strong>6호, 제2007/0028321호, 제2006/0172404호, 제2006/0162026호, 제<br />
2006/0153791호, 제2003/0215458호 및 제2003/0157643호].<br />
예를 들면, 컴퓨터 모의실험으로 작제된 상기한 사람화된 항체를 pHybE 벡터의 다중 클로닝 부위에 삽입할 수<br />
있다(미국 특허 출원 공보 제US2009/0239259호 참조). 세균 콜로니를 분리하고, 플라스미드 DNA를 추출하고,<br />
cDNA 삽입체를 전부 서열 분석한다. 각각의 항체에 상응하는 정확한 사람화된 중쇄 및 경쇄를 HEK 293-6E 세포<br />
에 동시형질감염시켜 사람화된 전장 항-사람 IL-1β 항체를 일시적으로 생산한다. 중쇄 이식된 cDNA 및 경쇄<br />
이식된 cDNA를 함유하는 pHybE 벡터를 HEK 293-6E 세포에 동시형질감염시켰다. 재조합 키메라 항체를 함유하는<br />
세포 상청액을 단백질 A 세파로스 크로마토그래피로 정제하고, 산 완충액을 첨가하여 결합된 항체를<br />
용출시킨다. 항체를 중화시키고 PBS에 투석한다. 사람화된 항체를 표 7에 기재한다.<br />
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공개특허 10-20<strong>12</strong>-0104542
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