(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

[0169]
[0170]
[0171]
[0172]
[0173]
[0174]
[0175]
포함한다.
파지 선택 후, 파지로부터의 항체 암호화 영역은 분리될 수 있고, 사람 항체를 비롯한 모든 항체 또는 임의의
기타 목적하는 항원 결합 단편을 생산하는데 사용될 수 있으며, 예를 들어, 본원에 상세히 기재된 바와 같이 포
유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 세균을 포함한 임의의 목적하는 숙주에서 발현될 수 있다. 예를
들면, Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합으로 생산하기 위한 기술도 문헌[참조: 국제 특허 출원 공보 제WO
92/22324호; Mullinax et al., (1992) BioTechniques 12(6): 864-869; Sawai et al., (1995) Am. J. Reprod.
Immunol. 34: 26-34; 및 Better et al., (1988) Science 240: 1041-1043]에 기재된 방법들과 같은 당업계에 공
지된 방법을 사용하여 사용될 수 있다. 단일 쇄 Fv 및 항체를 생산하기 위해 사용할 수 있는 기술의 예는 문헌
[참조: 미국 특허 공보 제4,946,778호 및 제5,258,498호; Huston et al., (1991) Methods Enzymol. 203: 46-
88; Shu et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 7995-7999; 및 Skerra et al., (1988) Science 240:
1038-1041]에 기재된 방법들을 포함한다.
파지 디스플레이에 의한 재조합 항체 라이브러리의 선별에 대한 대안으로, 대형 조합 라이브러리를 선별하기 위
해 당업계에 공지된 기타 방법을 적용하여 본 발명의 이중 특이성 항체를 확인할 수 있다. 한가지 유형의 대체
발현 시스템은 문헌[참조: 국제 특허 출원 공보 제WO 98/31700호; 및 Roberts and Szostak (1997) Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 94: 12297-12302]에 기재된 바와 같이 재조합 항체 라이브러리가 RNA 단백질 융합체로서 발현되
는 것이다. 상기 시스템에서, 공유 융합체는 mRNA와 3' 말단에서 펩티딜 수용체 항생제인 퓨로마이신을 갖는
합성 mRNA의 시험관내 해독에 의해 암호화하는 펩타이드 또는 단백질 사이에서 형성된다. 따라서, 특이적 mRNA
는 암호화된 펩타이드 또는 단백질, 예를 들면, 항체 또는 이의 부분의 성질, 예를 들면, 항체 또는 이의 부분
의 이중 특이성 항원에 대한 결합에 기초하여 mRNA의 복합 혼합물(예를 들면, 조합 라이브러리)로부터 집적될
수 있다. 이러한 라이브러리의 선별로부터 회수된 항체 또는 이의 부분을 암호화하는 핵산 서열은 상기한 바와
같은 재조합 수단(예를 들면, 포유동물 숙주 세포에서)에 의해 발현될 수 있고, 또한 최초 선택된 서열(들)에
돌연변이가 도입된 mRNA 펩타이드 융합체의 추가적 라운드 선별에 의해 또는 상기된 바와 같은 재조합 항체의
시험관내 친화성 성숙화를 위한 기타 방법에 의해 추가로 친화성 성숙화 처리될 수 있다.
또 다른 방법에서, 본 발명의 항체는 또한 당업계에 공지된 효모 디스플레이 방법을 사용하여 제조될 수도
있다. 효모 디스플레이 방법에서, 유전학적 방법은 항체 도메인을 효소 세포벽에 부착시키고 이들을 효모의 표
면상에 디스플레이하는데 사용된다. 특히, 상기 효모를 사용하여 레퍼토리 또는 조합 항체 라이브러리(예를 들
면, 사람 또는 쥐)로부터 발현되는 항원 결합 도메인을 디스플레이할 수 있다. 본 발명의 항체를 제조하는데
사용될 수 있는 효모 디스플레이 방법의 예는 미국 특허 공보 제6,699,658호에 기재된 방법들을 포함한다.
B. 재조합 IL-1β 항체의 생산
본 발명의 항체는 당업계에 공지된 임의의 다수의 기술로 생산될 수 있다. 예를 들면, 숙주 세포로부터의 발현
의 경우, 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 벡터(들)를 표준 기술에 의해 숙주 세포에 형질감염시킨다. 각종 형
태의 "형질감염"이란 용어는 외인성 DNA를 원핵 또는 진핵 숙주 세포에 도입시키 위해 통용되는 광범위한 기술,
예를 들면, 전기침투, 인산칼슘 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포함하는 것으로 의도된다. 원핵 또는 진
핵 숙주 세포에서 본 발명의 항체를 발현시킬 수 있지만, 진핵 세포에서 항체의 발현이 바람직하고, 포유동물
숙주 세포에서 항체의 발현이 가장 바람직한데, 그 이유는 상기 진핵 세포(특히 포유동물 세포)가 원핵 세포보
다 적당하게 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비하도록 할 가능성이 더 많기 때문이다.
본 발명의 재조합 항체를 발현시키기 위한 예시적인 포유동물 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들
면, 문헌[참조: Kaufman and Sharp (1982) J. Mol. Biol. 159: 601-621]에 기술된 바와 같은 DHFR 선택성 마커
와 함께 사용된, 문헌[참조: Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220]에 기술된
dhfr-CHO 세포를 포함함), NS0 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 항체 유전자를 암호화하는 재
조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포에 도입될 때, 숙주 세포에서 항체를 발현하거나 숙주 세포가 성장하는 배
양 배지에 항체를 분비하기에 충분한 시간 동안 상기 숙주 세포를 배양하여 항체를 생산한다. 표준 단백질 정
제 방법을 사용하여 항체를 배양 배지로부터 회수할 수 있다.
공개특허 10-2012-0104542
기능성 항체 단편, 예를 들면, Fab 단편 또는 scFv 분자를 생산하는 데에도 숙주 세포를 또한 사용할 수 있다.
상기 절차의 변형도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, 본 발명의 항체의 경쇄 및/또
는 중쇄 중 어느 하나의 기능성 단편을 암호화하는 DNA로 숙주 세포를 형질감염시키는 것이 바람직할 수 있다.
- 34 -